出口螺旋藻粉中藻胆蛋白测定方法地研究.pdfVIP

8 光谱仅嚣与分析 出口螺旋藻粉中藻胆蛋白测定方法的研究 张薇君 郝纯彦 (海南商检局 海口570105) l、前盲 螺旋藻是天然或人工养殖的一种藻类物质。其蛋白质中的发色基，按生物学 分类统称之为藻胆蛋白[1]，按营养药理学称之为藻蓝蛋白，按其结构，颜色又可 分为藻蓝素(Pc)、异藻蓝素(APc)、藻红素(PE)三种。近年来，螺旋藻粉及 其制剂已为国内外广泛应用于食品、保健、药物、天然色素等行业，有关这方面 的研究工作也有太量报道。日本[23等国提出．食品级螺旋藻粉其纯度(A。：。／A。) 应大于0．7，试剂级应大于4．0。其试剂的提纯，食品级可用硫酸铵沉淀法得到． 再经离子交换．分子膜超滤及凝胶过滤等方法即可得到试剂级的纯品。有资料¨1 介绍用高效液相色谱成功分离出色素异构体。 对于藻体中藻胆蛋白浓度的测定，国外文献H”介绍了用磷酸盐悬浮溶解藻 粉．反复冻融使细胞破壁，提取液用分光光度法测定的基本原理。但在国内目前 还没有成文的检验方法标准，这方面的工作也少见报道。本文对海南省人工养殖 的螺旋藻粉剂中藻胆蛋白的含量测定进行了研究探讨，在前人工作的基础上进行 了改进和完善。重点研究了细胞破壁方式，冷冻时间。提取液浓度及PH条件． 光照影响等因素，初步提出了一套完整、可行的测定方法。 2、实验部分 2、1仪器与试剂 uv2一100型紫外可见分光光度计(英国){超声波振荡器；离心机(3000r／min)： 冷冻冰箱(一20℃)：PH7．O磷酸盐缓冲液(0．05m01／1)。 2、2样品测定 准确称取干燥螺旋藻粉0．25、0．509，用PH7．O缓冲液溶解，超声振荡5Ⅲin 使藻粉分散．定溶于250ml容量瓶中，摇匀：将溶液转入250ml大口塑料瓶内， 置一20℃冰箱内冷冻12h(或放置过夜)，取出解冻后，用3000r／min离心机离心 处的吸光度(整个操作过程要求避光)。 2、3藻胆蛋白含量的计算 根据下式[8]分别计算出藻蓝索，异藻蓝素，藻红素的含量。 藻蓝素(PC)mg／m1=O．187A620一0．089A652 异藻蓝素(APC)mg／ml=0．196A662一O．04lA62II 藻红素(PE)mg／ml=O．104A562一O．253PC—O．088APC PC×V 藻蓝素w(％)=——×100 ． m×1000 APC×V ×100 异藻蓝素w(％)=—— mXl000 第3期 光谱仅嚣与分析 9 PE×V 藻红素w(％)=——×100 m×1000 式中：A一相应波长处测得吸光值。 v～样品定容体积、mI。 m～称样量，g。 藻胆蛋白w％=Pc％+APC％+PE％ 3、结果与讨论 3、1最大吸收波长的确定 文献【67 j62nm)处的摩尔吸光系数基本相符．只是最大吸收波氏稍有差别，sie聃lman【6] 3用海南三亚 海水养殖的螺旋藻经多次纯化分离出明显的PC与APc，其最大吸收波长分别为 nm 620nm与652nm．本文作者经简单纯化得到的吸收光谱图中亦可看出明显的620 峰值，故本文选620nm，652nm．662nm作为三个特征吸收波长。 3、2蛋白细胞的破壁方式 文献中提到利用反复冻融或用超声振荡破壁的方法，经过