丹参芽培养物中活性成分地研究.pdfVIP

寰I 4十冀■羹亿合●的“c-NMRtIll-300MI-Iz·DMSO—d6 对照，结果证实其甙元为苜蓿素。 丹参芽培养物中活性成分的研究 黄炼栋胡之璧刘涤 (上海200032上海中医药大学中药生物工程研究室) miltiorrhiza 丹参(Salvia Bge．)是我国的传统中药，具有活血化瘀、行气止痛的功效。丹参中的 活性成分主要有脂溶性二请醌类化合物和水溶性酚酸类化合物。脂溶性二萜类化台物如丹参酮I 173 A，丹参酮IB，臆丹参胃等具有抑菌，抑制血小板采集、耐块氯，玻瞢角；状莉辣供■等作用。水溶性 酚酸类化合物如迷迭番酸、紫草酸B、丹酚酸A具有清热、解毒，消炎、抗脂质氧化、抗■溃瘙一．抗肝 纤维化等作用。由于丹参野生资源日益减少，栽培品种退化严重，给帕i床用药和质量控制带采许多 困扰。为此．我们应用植物组织培养的方法对丹参芽培养韧的生长及其上述二类活性成分丹参翻 IA．丹参酮IB、隐丹参酮、迷迭番酸和紫草酸B进行研究．虽然有关丹参培养细胞中膳藩性成分 的研究已有许多报道，但有关芽培养物中活性成分研究却很少，仅有水溶性活性成分迷迭香酸和紫 草酸B的报道。 】实验栩『料 丹参芽培养物为我室从丹参愈伤组织上诱导而来，愈伤组织的诱导见胡月红等的报道，原植 物由我校药用植物教研室周秀佳教授鉴定． ■ 2实验方法 2．1 培养 Ms+1AA 选择生长旺盛的丹参芽培养物接种于含有50ml lmg／L+B．Almg／L培养基的 丹参芽培养物进行生长曲线测定。激素试验的培养基为MS基本培养基(对照)和MS基本培养基 分别加入2．4-D，ABA，BA和GA31mg／L，培养周期20d．所有数据重复3次． 2．2分析测试方法 2．2．1 丹参芽培养物生长测定：鲜重：将悬浮培养的丹参芽培养物gl减压抽滤除去培养液(滤网 中冰冻干燥后称重(rag／瓶)． 2．2．2 丹参芽培养物中括性成分的测定：①样品提取；取约50mg烃冰冻干燥的丹参芽培养物 Pak 510泵，991二极管矩阵检测器I色谱柱：NovaCIl 色谱仪：Waters 连依利特科学仪器有限公司)．水溶性活性成分测定：流动相，甲醇一二腈一水=37；1：62，用甲酸 调节pH值至2．67，检溯波长],／nm Pharma— 水=60：40．检测渡长l／rim254，流速为1．0ml／min．③标准晶：迷迭昏|骏购子美国ICN ceuticals．1nc．，紫草酸B由我校肝病研究中心赠送，丹参酮lA、丹参酮IB、酶丹参酮由本室胡 之璧院士提供。以上所用试剂甲醇为重蒸甲醇，乙腈为HPLC级，水为：j巳离子水·其余均为分析纯． 3 结果 3．1丹参芽培养物生长与活性成分积累的关系 我们在丹参芽培养物生长曲线的研究中对迷迭香酸、丹参酮IB和臆丹参酮进行了检测．从图 1(略)可以看出丹参培养物中活性成分的积累呈生长依赖型，于重积累幢和活性成分积曩重在均第 20d达到最大。 3．2 不同植物激素对丹参芽培养物生长的影响 芽培养物生长有抑制作用，ABA抑制作用最为显著，2．4--D次之．GA3量弱． 3．3 不同植物激素对丹参芽培养物中水溶性活性威分积累的影响 图3(略)显示4种不同檀物激索对迷迭香酸的积曩均有促进作月}，作用强度依次为ABA 。I 74 值得挺及的量BA的作用，虽然BA对丹参芽培养钧中永藩性活性成分含量的影响没有ABA强 (图3)，但对每瓶墙葬物中水溶性活性成分产量划量商(图珞)． 3．4不同植物激素对丹参芽培养物中脂溶性活性成分积累的影响 图5．6(略)显示，ABA对丹参芽培养物中脂溶性活性成分含量和产量均