鞭毛蛋白和NDVF蛋白的融合表达及其产物对小鼠的免疫原性分析.pdfVIP

其他o951 T060062 鞭毛蛋白与NDVF蛋白的融合表达 及其产物对小鼠的免疫原性分析 游猛潘志明耿士忠方 强 焦新安 (扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室 江苏扬州 225009) 1引言／目的 新城疫(Newcastle disease 定通报疾病，免疫预防是控制该病的重要手段。新城疫病毒(Newcastlevirus，NDV)的融合蛋 白(F)是新城疫亚单位疫苗研究的主要目的抗原。近年研究显示，鞭毛蛋白具有免疫佐剂的活性。但 迄今为止，针对鞭毛蛋白免疫佐剂效应的研究仍限于医学领域，在动物疾病方面的类似研究还未见报导。 为此，本研究通过柔性肽将鞭毛蛋白和NDVF蛋白部分基因片段串联，构建重组原核表达质粒， 利用原核表达系统表达鞭毛蛋白与F蛋白的融合蛋白，并以C3H／HeJ小鼠为动物模型，初步探讨融合 蛋白的免疫原性，以期为新城疫的免疫预防提供新方法。 2材料方法 2．1 材料 2．1．1 质粒与菌株含有NDV 兽共患病学重点实验室保存。 I、Hind 2．1．2试剂限制性内切酶EcoR DNA连接酶以及DNA回收试剂盒购 III，高保真Taq酶，T4 国产分析纯。 2．1．3实验动物@--8周龄雌性C3H／HeJd、鼠购自扬州大学比较医学中心。 2．2方法 应用PCR技术分别扩增鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白fliC基因以及含有新城疫病毒F蛋白部分表位的基 blot验证『zfC—F融合蛋白的免疫原性并以 pET-fliC—F，并将其转化入大肠杆菌BL21(DE3)qb表达。Western C3H／HeJd,鼠为模型进行动物实验。 3结果、讨论 白多抗血清均能特异性识别该表达产物，证实了二者能基本独立地形成各自的天然结构。动物实验结果 照组之间存在显著性差异；与F蛋白油乳剂免疫组相比，免疫效果相当；与 cia．原，比相组疫免白蛋 核表达的fliC．F融合蛋白能够保持野生型鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白的相关特性。 952蟋》2009年学术年会 由此可以推断，本实验表达的融合蛋[刍fliC—F不仅具有良好的F蛋白免疫原性，同时证实了鞭毛蛋 白的免疫佐剂效应。 参考文献 F A fusion aS or induce 【1】Cuadros L，et vaccines C，Lopez—HemandezJ，Domingueza1．Flagellinproteinsadjuvants specific immune responses(J)．InfectionandImmunity，2004，72(5)：2810·2816． 【2】萨姆布鲁克J，拉塞尔Dw等著，黄培堂等译．分子克隆实验指南【M】．第3版．北京科学出版社，2002，1474-1480． 【3】潘志明，黄金林，程宁宁等．病毒学报，2008，24(1)：41．46． 【4】游猛，潘志明，耿士忠等．中国家禽，2009． T060063 猪2型圆环病毒SD／2008株的分离鉴定及其培养特性幸 刘祥义卜’ 王秀萍卜‘ 陈春花2宋勤叶1谯建达1 冯 秀1 蒋丽钗1王昆1 (1．河北农业大学动物科技学院河北保定071001；2．河北省邯郸市动物疫病预防控制中心河北邯郸056005) c