徐淮山羊Oct4启动子功能的初步分析.pdfVIP

蘧 Hereditas(Beijing)2014年8,EJ，36(8)：793—799 WWW．chinagene．on 研究报告 徐淮山羊 Oct4启动子功能的初步分析 韦光辉，李东，左其生，张亚妮，朱睿，张蕾，刘志永，邱峰龙，李碧春 扬州大学动物科学与技术学院，江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室，扬州 225009 摘要：为确定徐淮山羊 Oct4(Octamer．bindingtranscriptionfactor4)基因启动子活性区域，并初步探讨 TSA (TrichostatinA)和VPA(Valproicacid)对 Oct4基 因启动子活性的调控作用，文章采用Primer5．0设计包含Oct4基 因启动子不同长度片段的特异性PCR引物，扩增并定向克隆至PGL3．Bacic荧光素酶报告载体，分别转染gEF、 P19和 COS7细胞，通过 TSA和 VPA诱导，进行双荧光报告基 因活性检测。同时用 Oct4启动子一1516～+30bp 片段替换pEGFP．N1中的CMV启动子，通过 GFP荧光表达检测 Oct4启动子的活性。结果表明：在gEF、P19 和COS7细胞中Oct4启动子各片段均表现出不同程度的活性，且最强活性区域为上游一1516～+30bp，基本活性 区域为一238-+30bp；在一1516-一946bp、一615～96bp区域存在正调控元件，在一1936-一1516bp、一946-一615bp 区域存在负调控元件；终浓度为 1gmolL／的TSA和4mmol／L的VPA为诱导的最佳浓度，均能显著增强Oct4 基因启动子的活性；一1516-+30bp片段能够启动GFP的表达。研究结果为揭示Oct4基因的转录调控机制奠定 了基础 关键词：Oct4；启动子活性；TSA；VPA；诱导 FunctionalanalysisofOct4promoterinXuhuaigoat GuanghuiWei，DongLi，QishengZuo，YaniZhang，RuiZhu，LeiZhang，ZhiyongLiu， FenglongQiu，BichunLi KeyLaboratoryofAnimalBreedingReproductionandMolecularDesignforJiangsuProvince，CollegeofAnimalScienceandTechnology， YangzhouUniversity，Yangzhou225009，China Abstract：TheaimofthisstudywastodeterminetheactivityregionofOct4(octamer-bindingtranscriptionfactor4) promoterinXuhuaigoat，andtoinvestigatetheeffectofTSA(trichostatinA)andVPA(valproicacid)onOct4promoterac- tiviyt SpecificPCRprimersofOct4promoterincludingdifferentlengthsofrfagmentsweredesignedbyPrimer5．0，hten wereamplifiedandclonedintoPGL3-Bacicluciferasereportervector．Allthereconstructionvectorsweretrna sfectedinto gEF,P19nadCOS7cells，respectively．AfterTSAandVPArteatment，theactiviytofdual—luciferasereportergeneinthese threetrna sfectedcellswasdetected．Inaddition，theCMV promoterofpEGFP-N1wasreplacedbythe一1516—+30bp 收稿 日期：2014—01-22；修回 日期：2014—02—28 基金项 目：国家转基因重大专项 (编号：2013ZX08008—003)资助 作者简介：韦光辉，在读博士，研究方 向：分子克隆和基因表达调控机制 。E-mail：weiguanghui2006@gmail．com 通讯作者：李碧春，教授 ，博士生导师，研究方向：动物胚胎工程与生物技术。E—mail：yubcli@yzu．edu．cn DOI：10．372