鉴别诊断AIV亚型DNA芯片研究初探.pdfVIP

查些圭塑茎查兰塑!!!翌苎!!!!型!!!!型!!!竖坠!!!型!竺圣!丛!!塑型． 鉴别诊断AIV亚型的DNA芯片研究初探 王秀荣1 闰玉清2李杰2童光志1 于康震”朱大海2 fl中国农业科学院啥尔滨善医研究所善医生物技术国索重点实验室，哈尔滨15001 2．哈尔滨基太生物芯片开发有隈责任公司，哈尔滨15001) 关键词：^IV：DNA芯片；鉴别诊断 1 前言 基因芯片技术是90年代兴起的可以同时检测 。代表H5．591 成百上千、甚至上万个基因的新技术，具有高通 o代表M672 量和并行化特点，可以在基因水平确定病原遗传 6代表NS870 三代表H7．525 物质的存在，提供诊断传染病新方法．流感是一 ：代表1-19-808 种古老的疾病，最显著的生物学特征之一是亚型 代衰对照后粒 众多，目前已知有15个血凝素、9个神经氨酸酶 选择AIVH9亚型鸡胚尿囊液和壳膜，常规提取 亚型，不仅可以引起禽流感，还是人、马、猪、 病毒RNA，通用引物反转录，并Cy-3荧光染科标记． 鸭子、鹅等哺乳动物和水禽流感的病原． 杂交过夜，扫描并分析图象． 禽流感(Avianinfluenza，AI)被国际兽疫局 3结果与讨论 确定为一类传染病，目前高致病力禽流感毒株均 H9亚型病毒样 为H5、H7亚型。但不是所有H5、H7亚型毒株都通过扫描观察到如下结果：AIV 是高致病力的，急需进行亚型鉴别诊断．利用基 品与芯片杂交后，M、NS，H9亚型的II^基因都出现 因芯片技术鉴别亚型，可以建立一种斯的迅速、 了阳性荧光信号。点系统阴性对照、H5、H7亚型的 H^靶基因位置则不出现或有极弱荧光信号，与实验 准确诊断高致病力禽流感的实验室诊断系统． A型AI毒株M、NS基因是相当保守的，H5、 H7、H9亚型之内HA、NA也相对保守，同源性可 达90％以上，亚型间同源性较低(30％--70％)．本 实验参照AIV标准血凝素序列：Afl44305(H5)、 Af202232(H7)、D90305(H9)，RT．PCR扩增相应 ^ B 亚型保守区域作靶DNA，反转录过程中Cy-3标记， 圈2杂交后芯片扫描结果 得到cDNA产物，与DNA芯片杂交，得到预期结 预期结果一致．见图2．结果表明，可以用芯片技 果． 术直接检测病毒的反转录产物，具备制备AIV亚型 鉴别诊断芯片的可行性． 2材料与方法 图2中，两张芯片上相同靶基因荧光信号强弱 2．1制鲁芯片 不同，是由于所用的AIV样品来豫不同造成的．^