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基于酪氨酸电化学的蛋白质磷酸化检测 杨郁，郭良宏*，曲娜，韦明元 中国科学院生态环境研究中心，环境化学与生态毒理学国家重点实验室， 北京市海淀区双清路18号，邮编100085 *联系人：电话：010E-mail 地址：LHGuo@rcees.ac.cn 蛋白质磷酸化是蛋白质翻译后修饰中最常见、最重要的一种共价修饰方式， 在许多生物效应中起着开/关的作用，是基因表达和蛋白质合成的重要调控者， 它几乎参与生命活动的所有过程。尤其在细胞应答外界刺激的信号传递途径中， 蛋白质磷酸化是目前所知道的最主要方式。其中负责磷酸化的蛋白激酶的活性常 会受到小分子化合物的调控。目前已有文献报道了一些分析方法应用于蛋白质磷 酸化的测定，如：[32P]放射性标记法、免疫印迹法、质谱法、荧光法、表面等离 子体共振等，这些方法操作繁琐且成本较昂贵。因此，需要建立一种简单、快速、 高灵敏的蛋白质磷酸化分析检测方法，并在此基础上研究小分子化合物对蛋白质 激酶活性的调控效应。本研究建立了一种免标记的蛋白质磷酸化电化学传感检测 方法。通过在氧化铟锡（ITO ）电极表面共价固定含酪氨酸的多肽分子，该分子 为蛋白质酪氨酸激酶的底物。以底物分子中的酪氨酸作为电化学信号探针，通过 电子媒介体催化放大酪氨酸的电化学信号。利用正常酪氨酸和磷酸化酪氨酸之间 电催化信号的差异，实现对蛋白质磷酸化反应的检测，并以此来研究小分子化合 物对蛋白质酪氨酸激酶的调控效应。本研究中重点解决了电子媒介体在修饰电极 上的电化学动力学、多肽分子固定的表面化学、激酶催化的多肽磷酸化反应的电 化学检测机制等关键问题。 Acknowledgment This work was supported by the National Natural Science Foundation of China (No.and. References [1] Ahn, N. Chem. Rev. 2001, 101, 2207-2207. [2] Johnson, L. N.; Lewis, R. J. Chem. Rev. 2001, 101, 2209-2242. [3] Adams, J. A. Chem. Rev. 2001, 101, 2271-2290. [4] Goldsmith, E. J.; Akella, R.; Min, X. S.; Zhou, T. J.; Humphreys, J. M. Chem. Rev. 2007, 107, 5065-5081. [5] Burkhard, K.; Smith, S.; Deshmukh, R.; MacKerell, A. D.; Shapiro, P. Curr. Top. Med. Chem. 2009, 9, 678-689. [6] Li, T.; Liu, D. J.; Wang, Z. X. Anal. Chem. 2010, 82, 3067-3072. Label-Free Electrochemical Measurement of Protein Tyrosine Kinase Activity and Inhibition Based on Electro-catalyzed Tyrosine Signaling Yu Yang, Liang-Hong Guo*, Na Qu, Ming-Yuan Wei State Key Laboratory of Environmental Chemistry and Ecotoxicology, Research Center for Eco-Environmental Sciences, Chinese Academy of Sciences, 18 Shuangqing Road, P.O.Box 2871, Beijing 100085, China.