后纵韧带骨化症差异蛋白验证与其功能研究.pdfVIP

第一次全军脊柱外科学术会议暨广东省医学会脊柱外科年会 钛合金表面纳米仿生涂层修饰对成骨细胞粘附的影响 范纯泉 叶晓健堆许国华何海龙 第一作者：范纯泉上海长征医院骨科博士研究生 通讯作者：叶晓健教授 单位：长征医院，上海市，邮编200003 E—mail：fanchunquan@gmail．com 联系电话 摘要： 目的；观察钛合金表面纳米羟基磷灰石／丝素蛋白复合涂层修饰对成骨细胞粘附的影响。 方法：利用静电雾化喷涂技术在钛合金底物(Ti一6AI一4V)表面构建了纳米羟基磷灰石／丝素蛋白复合 涂层。将成骨细胞MC3T3．E1分别与表面光滑的钛合金、表面纳米化的钛合金、单纯纳米羟基磷灰 石涂层修饰及表面复合涂层修饰的钛合金共同培养，一定时间后用细胞计数及扫描电镜观察等技术 进行比较。 结果：l、纳米羟基磷灰石／丝素蛋白悬浮液的制备及表征。应用共沉淀法制备了nHA／SF悬浮液，利 用扫描电镜、傅立叶转换红外光谱、能谱分析、x线衍射、热重分析等进行表征。制备的悬浮液中 间以化学键合的方式构成了稳定的悬浮液。2、通过调节静电雾化技术的参数如悬浮液浓度、悬浮液 流速、电场电压、底物与喷嘴距离等制备了均匀、无明显裂缝的复合涂层结构。扫描电镜及透射电 镜显示涂层中羟基磷灰石晶体呈棒状，直径在40rim左右，长度在150nm左右，涂层两种成分结合 紧密。3、Hoechst33342染色、计数及分析：随着时间的延长四种材料上粘附的细胞均明显增加 光滑(P0．01)，由此可见，成骨细胞在复合涂层表面的早期粘附效果最好。4、电镜观察：成骨细胞 与材料共培养1天、3天、7天时四种不同钛合金表面的成骨细胞数量nHA／SF涂层nnA涂层组 纳米化光滑。较其他三种材料表面，在复合涂层表面成骨细胞伸展面积更大，具有较多突起。 结论：1、利用共同沉淀法可以制备稳定的nHA／sF悬浮液，并且推测丝素蛋白可以定向诱导羟基磷 灰石晶体的生长。2、通过对钛合金表面进行纳米羟基磷灰石／丝素蛋白复合涂层修饰可以明显促进 成骨细胞的早期粘附，为下一步成骨细胞在植入物表面的新骨再生奠定了重要的基础。这提示我们 可以通过钛合金表面行纳米羟基磷灰石／丝素蛋白复合涂层修饰来提高其骨整合性能。 后纵韧带骨化症差异蛋白验证及其功能研究 李阳 上海长征医院骨科上海200003 摘要 目的后纵韧带骨化症(ossification ofposteriorlongitudinalligament，OPLL)是临床上常见 ．．650．． 第一次全军脊柱外科学术会议暨广东省医学会脊柱外科年会 的脊柱疾患，发病率可高达20％34％。OPLL的致瘫几率显著高于其他颈椎退变性疾病，其原因 包括缺乏有效的早期筛选和诊断方法、自然史不明无法确定手术时机、术后骨化物持续生长等。近 年来对其发病机制的研究取得了一些成果，如COL6A1限制性片段多态性与OPLL相关、应力因素 是骨化灶进展的重要局部因素等，但其发病机制仍不明确。本研究在前期蛋白组学的研究基础上， 实性。并且从无后纵韧带骨化的患者与后纵韧带骨化患者的外周血中分离得到两种差异蛋白RNA， ChainReaction， 再利用逆转录技术，实时荧光定量聚合酶链式反应(Real—TimeQuantitivePolymerase RT-PCR)技术验证编码两种蛋白的mRNA存在差异，试图为颈椎后纵韧带骨化症早期诊断及进展 寻找血液标志物。采用SiRNA技术对体外培养的后纵韧带骨化韧带细胞进行干扰，继续培养的同时 设定未干扰的对照组细胞进行对比，以此来确认OGN在后纵韧带骨化中的作用，沉默OGN基因是 否能做到阻断骨化过程。以期寻找OPLL发生、发展过程中特异的蛋白标记物，为临床OPLL筛查 和诊断、预后判断、寻找治疗药物靶点、了解OPLL发生发展的分子机制提供研究基础。 方法 以颈椎前路椎体次全切除术中获得的OPLL后纵韧带组织和外伤患者正常后纵韧带组 织做为研究对象。在前期蛋白组学研究得出的正常颈椎后纵韧带与后纵韧带骨化症后纵韧带组织间 的差异蛋白的基础上，文献回顾总结各差异蛋白的基本信息、分子功能、细胞分布及其参与的生命 过程，推测其在OPLL发病机制中的可能作用。对有深入研究价值的差异表达蛋白质0GN以及Ⅵ0Ll