胶质瘤干细胞的分选、鉴定与生物学特性.pdfVIP

紊乱能促进MODS的发病，因此是急性重症高原病并发MODS不可忽视的原因之一。 动物实验表明，急性高原环境暴露下，大鼠肠粘膜屏障功能损伤，通透性增高，肠系膜 淋巴结和脾脏细菌移位。高原环境下+饥饿可以增加大鼠肠粘膜的损伤程度，促进细菌 和内毒素移位。给以谷氨酰胺预处理，对高原环境引起的胃肠粘膜损伤具有一定的保护 作用，麓降低肠粘膜通透性，减少细菌易位。进一步研究发现，肠粘膜的损伤与氧自由 基SOD、NO、MDA生成增加、炎性细胞因子释放增多和抗氧化物质减少有关。 结论：高原急性霄扬粘膜损伤是急性重癍高原病并发MODS的重要原因。 胶质瘤干细胞的分选、鉴定及生物学特性 卞修武下修豇戈 第三军医大学病理学研究所重庆400038 stem 肿瘤于细胞或称癌症于细胞(cancercells，CSCs)是目前肿瘤研究的前沿领域 和研究新热点，并被认为是将来肿瘸治疗的最重要靶标。但是，CSCs标记的特异性和 临床肿瘤学意义不够明确，给进一步分选和纯化带来困难，是目前该领域研究的瓶颈问 题之一。CSCs多重而复杂的生物学特性和功能也亟待进一步阐明。本课题组以胶质瘤 为研究对象，探索如多种分选CSCs的新方法；利用这些方法从原代胶质瘤组织和细胞 系中分选得到CSCs，即胶质瘤干细胞(GSCs)：观察其自我更新、增殖分化、成瘤、 迁移侵袭、耐药、始动血管新生等生物学特性；并研究了介导这些效应的分子机制。 一、肿瘤干细胞的分选新方法 现有的CSCs分离、富集方法多是利用流式细胞术或免疫磁珠技术进行分选，然而， 这两种方法不仅需要一定的设备，对细胞的活力也有影响，且敏感性和特异性尚存疑问 【l】。除了采用上述鼯_季中方法分选、培养CSCs外，我们自行建立了四种简便易行、可靠 有效的分离培养方法。即：(1)克隆筛选法：通过体外克隆筛选，发现人恶性胶质瘤细 胞系形成克隆可分为紧密型、过渡型和松散型三种类型，其中紧密型克隆的分化程度最 低，在无血清培养基内可形成类似神经干细胞的细胞球，而且具有自我照新能力、多向 分化潜能，并表达享孛经干细胞的标志物，属于GSCs克隆【2】。(2)特定条件培养筛选法： 采用先让肿瘤细胞在含血清的培养基中贴壁生长，然后逐渐增加干细胞培养基浓度的方 52 式筛褥GSCs。所建立的方法在筛选GSCs时与文接更换干细胞培养基的方式相魄具有 高效率、高纯度的优点，可以很好地避免因快速撤除含血清的培养基所导致的细胞聚集 成团或大量死亡【3】。(3)耐药富集筛选法：利用肿瘤干细胞对化疗药物抵抗的特性，用 含有5ng／ml长春新碱的神经干细胞培养基获得第一代肿瘤细胞球，继而单细胞接种于 性强的特点，先除去黏附能力弱的细胞，再在趋化小室中加入亿学趋化招弓|物诱导GSCs 跨基旗簇侵袭，并进行收集【4】。以上几种方法在一定程度上有效地解决了CSCs分选的 技术“瓶颈”。 二、胶质瘤干细胞的“于性’’ 用自我更新、增殖、分化及成瘤特性对GSCs进行鉴定。结果发现，在肿瘤细胞群体中， 比，GSCs具有极强的自我更新能力，在神经干细胞培养基中成球生长，且能够连续传 代；经诱导分化蜃，可分化为表达神经系统三种谱系细胞，即具有星形细胞、少突胶质 细胞和神经元表型的细胞，部分细胞兼有两种谱系细胞表型[21；GSCs体内成瘤能力极 强，极少量的GSCs即可在皮下或脑内成瘤，所形成的移植瘤增殖活{生高，同时保持原 发瘤的混合细胞成分【7】。随着体内传代代数的增加，瘤体内GSCs标记物CDl33阳性 细胞比例增加【5】。上述结果从GSCs角度揭示了胶质瘤成分多样性的发生原因。 三、胶质瘤干细胞促血管生成作用 我们透过研究入脑GSCs的组织分布及英与盘管生成和患者预后的关系，发现GSCs 密集于新生微血管周的现象。基于此，进～步提出“肿瘤干细胞与内皮(祖)细胞之间 存在crosstalk，通过血管生成因子和(或)横向分化，参与调控肿瘤血管新生化”的假设 【l】，并进行了初步探讨。研究发现，GSCs具有自发产生高水平促血管生成因子VEGF 和IL．8的能力，并诱导内皮细胞和内皮祖细胞增殖、迁移和管型形成作用【6】。GSCs高 生成作雳，提示此两种受俸高表达可能是GSCs高分泌促血管生成因子，进丽促进盘管 新生的机制之一。 CSCs虽在肿