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2005年北京地区肝病感染年会论文汇编一大会发言
y一干扰素对HCV复制子的抑制作用研究
贾因棠魏来蒋栋季颖丛旭费然
北京大学人民医院肝病研究所
C
丙型肝炎病毒(Hepatitis
virus
慢性HCV感染，其持久病毒清除率(sustained
RBV)合用SVR也仅有35～40％“’，虽然聚乙二醇化干扰素(Pegylated
型肝炎的治疗取得了很大改善，SVR可提高N50～60％。’，但仍有相当一部分患者不能获得持久的病毒阴转，
因此，寻找新的更有效的抗病毒治疗药物或合并用药治疗方案仍是HCV研究的最终目的。长期以来，由于缺乏
HCV体外感染的细胞模型，使抗HCV药物的研究及筛选严重受阻“’，近几年来，在Hcv研究史上取得的重大突
破就是建立THcv
Gene，ISGs)的表达情况。
毒作用的干扰素刺激诱导皋因(InterferonStimulating
材料与方法
一、材料
1．TaqDNA聚合酶、反转录酶一SuperscriptII、01igo
l ipofectin、G418及DMEM均购自Invitriogen公司
2．FCS，购自Hyclone公司
3．Huh7肝癌细胞系为本所保存
4．㈣NSSA蛋白单克隆抗体由奉所生产。HRP标记的羊抗鼠IgG购自SantaCruz公司，
5．BcA蛋白定量试剂盒及ECL化学发光显色试剂盒均购自美国Pierce公司
inVitroT7
6．Mega TranscriptKit购自美国Ambion公司。
7，IFN—a2b(Interferonalfa一2b，Intron research
A)购自美国Schering—Plough
一干扰素购自美国RD公司。
M．Lemon(The
8．Hcv—N(Ib)复制子cDNA质粒(pNNeo／3—5BRG)由ProfessorStanley
ofTexasMedicalBranchatGalveston)惠赠
9．抗HCVNSSA蛋白单克隆抗体由本所生产，HRP标记的羊抗鼠IgG购NSantaCruz公司。
10．PCR引物由北京博亚公司合成
11．荧光定量PCR试剂盒购自深圳市匹基生物工程有限公司。
二、方法
M．
Stanley
of Branchat
Lemon(The TexasMedical I酶切
University
T7
inVitro
线性化后，经酚／氯仿抽提后，用Mega Transcript
DMEM)，约经2～
酚／氯仿抽提，乙醇沉淀回收后，用Lipofectin脂质体转染Huh7细胞，经G418筛选(500／ml
2005年北京地区肝病感染年会论文汇编一大会发言
达)抗G418的酶，故含有HCV复制子的细胞能够在含G418的培养基中生长。
2．细胞培养及IFN—Y处理人类肝癌细胞系(Huh7)接种于含1096胎牛血清、200¨mL-谷胺酰氨、lOOu／
Modified
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