寡糖分离分析和制备.pdfVIP

中国科学技术协会青年科学家论坛第178次会议论文集 寡糖分离分析与制备· 郭志谋1一，薛兴亚1，肖远胜1，丰加涛1’2，张秀莉1，梁鑫淼1 (1．中国科学院大连化学物理研究所，大连116023．2．中国科学院研究生院，北京100039) 医学、药学的一大研究热点。另外，寡糖因具有提高免疫力、促进饲料利用率等独特的生物活性， 已作为添加剂逐步应用于饲料、农药、保健品、食品等多个领域。【u通过提取和生物降解获得寡糖 技术日趋成熟，可制备各类寡糖混合物。【21但是，这些寡糖是由不同聚合度的寡糖组成的混合物。 当前寡糖研究中的一个重要问题是缺乏单一寡糖化合物分离制备与表征。因此发展高效、高通量寡 糖分离分析与制备技术，制备寡糖单一化合物，并且在此基础上进行结构表征和生物活性研究，对 于推进寡糖研究具有重要意义。 寡糖具有结构复杂，极性强，无紫外吸收等特点，在组成、连接、衍生化等方面又具有高度复 杂性，实现其分离纯化十分困难。寡糖研究大多数以发展质谱结构表征方法为主，而在建立高效分 离方法方面的进展较少。高效液相色谱法具有分离效率高、重复性好、分离速度快、易于从分析规 模放大到制备规模等优点。但是高效液相色谱目前难以在寡糖分离制备中应用比较困难，主要是受 色谱分离材料和制备色谱技术的限制。由于寡糖的极性很强，在常规反相色谱柱上没有保留，难以 实现分离。另外，柱装填、制备色谱方法发展、检测等技术问题也制约着高效制各色谱用于糖分离 纯化。近年来，亲水作用液相色谱(HILIC)作为一种用于分离强极性化合物的液相色谱模式受到了 广泛关注，成为有希望解决寡糖分离制备和表征问题的重要方法之一。p1 ‘作者简介：薛兴亚，男，1970年生，博士，中科院大连化物所副研究员，硕士生导师。1995年毕业于大连理工大学 获硕士学位，同年进入大连化物所工作，2000．2001年赴德国国家环境与健康研究中心进行合作研究。2004年毕业于 大连化物所分析化学专业，获博士学位。2005年晋升为副研究员。主要从事复杂样品的多模式多维高分辨率、高灵 敏度检测与分析，分离制备，色／质谱联用及化学信息学研究，围绕色谱的基本理论、技术、方法、软件和应用开展 了系统工作．所发展的复杂样品分析软件系统，通过线性梯度／程序升温条件预实验，可快速准确获取复杂未知样品 的液相／气相色谱保留参数和峰形规律，具有重叠峰解析、辅助定性、仿真优化、活指纹谱构建等功能，成功应用于 复杂样品的气、液相色谱分离分析。2005年承担完成大连化物所博士探索基金“中药标准组分化学表征数据库的构 建”：2004年作为项目骨干参加完成中科院知识创新工程重要方向项目“基于现代理论和技术的复方中药系统研究” 年参加科技部国际合作项目“中药抗抑郁活性成分的高通量制各与筛选”；2006年参加辽宁省科技计划重 干粉针剂的研究开发”(2006E1 lSF070)。已发表文章78篇，其中SCI论文29篇。 ·133· 中国科学技术协会青年科学家论坛第178次会议论文集 HILIC silica)，在亲水作用模式下，分别对果寡糖和壳寡糖进行了色谱分离分析和制备。 ClickCD固定相是使用click chemistry方法将D．环糊精键合到硅胶表面得到的一种新型极性固 定相，可用于分离核苷、糖类、糖苷、有机酸等强极性化合物。弘j如图1所示，在亲水色谱模式下， 果寡糖经过ClickCD色谱柱得到了很好的分离。为了提高蒸发光散射检测器(ELSD)的灵敏度， 本文对常规亲水色谱方法进行了改进，使用乙腈作为弱溶剂，使用乙酸铵水溶液和甲醇作为强溶剂。 在分离过程中保持水的含量恒定(10％)而线性增大甲醇的含量。如文献所述，该方法虽然不能改 善分离度，但是大大提高了ELSD的检测灵敏度，降低了基线噪音。 factory)上的分离制备色谱图。 图2是壳寡糖(寡聚2．氨基葡萄糖)在纯化工厂(purification 纯化工厂由四通道平行制备色谱系统和自动馏分收集系统组成，是进行高通量分离制备的有力工具。 AtlantisHILIC 本文使用Water