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130 中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术研讨会论文集 I型马立克氏病病毒VP22的结构与功能 秦爱建 陈鸿军 (扬州大学江苏省动物顶防医学重点实验室，江苏扬州225009) 摘要：VP22是I型马立克氏病病毒(MDV)被膜的主要组分，为MDV复制和扩散所盛需的，开展对VP22 功能的研究有助于深入研究MDV的致病机制。本研究采用基因克隆、表达等方法，对MDVVP22的结构和功能 进行了研究，结果发现MDVVP22合有蛋白转导域井具备传导蛋白的功能，VP22能够高效转导蛋白进入细胞核， 井能增强与其融合表达抗原的细胞免疫效果。研究结果提示，VP22将成为治疗人类和动物疾病的潜在运输载 体，可以弥补DNA疫苗免疫缺陷和提高治疗性物质的转导效宰。 关键词：I型马立克氏病病毒；VP22；蛋白转导域 马立克氏病病毒(MamkjDisease Virus，MDV)属于q疱疹病毒，由核芯、核衣壳、被膜和囊膜四 白对血清I型MDV的基因复制、病毒增殖和组装有着极其重要的调节作用。Dorange等通过构建缺失 VP22(MVP22)的研究依然并不丰富，研究者似乎更热衷于探索HSV-1 得日益广泛。 VP22具 些物质不仅依然保存着天然的活性，而且分布广泛、摄人效率更高。Dorange等发现MDV-1 有与HSV-I相似的蛋白转导功能。Hung等研究发现MDV-1 E7抗原融合表这的免疫效果，主要产生CD8+T细胞介导的细胞免疫应答。本移f究利用无致病性的 VP22蛋白转导功能的研究结果提示：CVl988VP22可作为一种高效便捷的蛋白转运工具，对于弥补 DNA免疫缺陷和提高治疗性物质的转导效率具有非常重要的意义。 1材料与方法 1，1毒株与菌株 工程菌购于美国Promega公司。 1．2载体与主要试剂 pGEM—T 国QIAGEN公司；BamHI、EcoR I等限制性核酸内切酶购自大连宝生物有限公司；蛋白酶K购自 德国MEREK公司。 1．3引物设计与PCR扩增、重组质粒的构建及鉴定、单克隆抗体的研制 按常规分子生物学方法进行。 +资助项目：国家自然科学基金(编号 +作者简介：秦爱建(1961-)男，江苏人。教授．博士生导师；研究方向动物疫病病原学及其免疫与致病机理： E—mail：aijian@yzueducnTel：0514-7979224．7979217Fax：0514-7979217 中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术研讨会论文集 131 2结果和分析 2．1不同致病型马立克氏病病毒VP22基因的序列分析 胚成纤维细胞或鸡胚成纤维细胞，然后提取总DNA。根据已发表的MDVGA株VP22序列设计引物， 成功扩增出MDV-I不同毒株的聊2基因。将PCR产物克隆T载体并测序分析，结果发现：强毒株 (“KPRA／TKP“)o这可能对于VP22在胞内稳定存在、病毒组装和释放有着重要意义。 2，2 CVl988弱毒疫苗株VP22箍基端原核表达及特异性单抗研制 为深入研究VP22的功能，制备特异性抗体是非常必要的。本研究利用MDV-1无致病性的 菌进行原核表达。结果发现，只有VP22羧基端能够得到高效可溶性表达。以此表达产物作为可溶性 (aa94—243)融合蛋白，制备出5株抗MDV-I 表现为：3F7单抗染色所有MDV空斑，其余单抗能使整个单层的细胞核呈现荧光。另外，73F7能与杆 和4EA-单抗进行鉴定，确定了这两株单抗针对的具体位置均在aa94—193处，是蛋白转导域的预测位置。 这5株单抗的制备对于研究VP22蛋白转导域的功能有非常重要的意义。 2．3 Western—blot证明VP22分子量约为33kD 以CVl988，GA，RBlB病毒感染的CEF总蛋白，进行Westernblot检测。结果显示，这些病毒出 现两条特异性条带。大小分别约为44kD和33kD，而CVl988病毒的核提取物主要是磷酸化VP22， 分子量约为33 们在不同毒株感染的CEF