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还原型辅酶I(NADH)调控鱼藤酮引起的PCI2细胞
张积仁K．Vrecko Tomic
D．Storga
K．Nadlir郾r G．D．BirkrnayerG．Reibnegger
鼠嗜铬细胞瘤细胞系PCI2细胞接触一种线粒体损伤荆鱼藤酮后，能启动细胞凋亡反应
和线粒体磷酸化抑制。研究表明．基因表达和细胞周期改变、凋亡等多因素均参与线粒体功能
抑制【1J。但是。如何促进线粒体损伤后正常细胞修复以及与线粒体损伤和磷酸化有关的细胞
凋亡能否被抗凋亡机制解救尚未阐明。我们既往研究表明，还原型辅酶NADH能刺激内源性
明鱼藤酮造成线粒体损伤后掏亡产生和NADH修复线粒体损伤生物学机制。
材料与方法
rnmal／L鱼藤
h，弃培养液，加入含O．5，1．0，2．0
5％03z饱和湿度的二氧化碳培养箱中培养48
酮的培养液继续培养24和48h。采用h仉1比色法检测鱼藤酮对PCI2细胞毒性作用。另外，
mmol／L鱼
为检测N虹m预防鱼藤酮引起细胞线粒体损伤，P(12细胞中加入含0，5，1，0，2．0
藤酮以及400 NADH的培养液培养48h，对照组不加NADH。
t．,g／ml
NADH或不含NADH的培养液
的培养液置于96孔板培养24h，弃培养液，加入含400／-g／ml
培养48h，以PCI2细胞与1．0mmol／L鱼藤酮孵育24h作为对照。 ’
mmol／L鱼藤酮培养液，另
3．流式细胞术检铡PCI2细胞传代后分两组，一组加人含l
一组加入不舍鱼藤酮培养液。培养24h后。含鱼藤酮组细胞以5X106／ml重新接种，分别加
入含400 h后，胰酶消化，0．5％多聚甲醛4℃
pg／mlNADH和不古NADH培养液继续培养48
固定10min，0．1％Triton-100增加细胞膜通透性，细胞以2．5×los／300m分管，洗涤，离心，
孵育1
离心，振荡悬于P13S液，流式细胞术检测PCI2存活和捅亡细胞的荧光强度。
G．D．Birkmayef)
G．Reibnegger)；维也纳Birkmayer研究所(K．NadlingerD．StorgaTcnfic
212 中国癌症研究进展⑤
4．统计学处理统计分析、数据处理均用SPSS7．5软件包完成。
结 果
1．NADH增加PCI2细胞对线粒体损伤的抵抗力鱼藤酮能明显抑制PCI2细胞增殖，细
藤酮和NADH的培养液培养24h，鱼藤酮对细胞抑制率分别下降20，4％、36．4％和33．5％，显示
NADH能抑制和阻断鱼藤酮对PCI2细胞的损伤(图2)。
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