干细胞治疗肝病地研究现状.pdfVIP

干细胞治疗肝病的研究现状 第三军医大学西南医院全军感染病研究所(400038) 刘涛张世昌王英杰 干细胞的可塑性为严重肝病的治疗带来了曙光。近年来，许多研究团队就能产生肝细胞的干细胞 来源、各种干细胞向功能性肝细胞的诱导分化策略以及其在肝病治疗的基础研究做了大量工作。 1．肝内肝外的干细胞 从肝脏的胚胎发育学和肝脏形成后的肝细胞再生来源的角度推测，可以产生肝细胞的来源主要有 smmcells，ESc)、残留在肝内的肝干细胞和其他组织器官的特异性干 三个：胚胎干细胞(embryonic 细胞，后两者归属成体干细胞，这一推测正在不断地被实验证实。 ESe具有在体外无限增殖并保持其能分化成所有细胞类型的特性，理论上它可以向三个胚层的任何 细胞分化，其中也包含肝细胞。自鼠与人的ESc被相继分离成功后，其多能分化潜能已在体内外诱导实 验中所证实，这不仅为胚胎发育研究提供良好的工具，也为干细胞为基础的治疗提供资源。目前，限制 ESc研究应用的因素主要包括：伦理学问题、组织相容性以及移植后畸胎瘤的发生。全面有效地诱导分 化和分选富集可减少或避免畸胎瘤的发生，经改进的体细胞核移植技术在灵长类ESc的克隆成功应用有 望解决组织相容性问题，但无法回避伦理学问题。新近通过向小鼠及人体细胞稳定转染几个关键的转录 因子从而成功产生Esc样细胞．诱导的多能干细胞(reducedpluripotent 理学、组织相容性问题。这一新颖的发现提示无论是干细胞还是成熟的体细胞可能都具有高度的可塑 性，通过一定的细胞外分子诱导或细胞内基因修饰，可以促使各类细胞顺向、逆向或横向分化，而且 这种分化可以跨越多个分化层次与途径，从而使干细胞的概念模糊化。 在肝脏发育成熟后，包含着三种不同的细胞参与肝细胞的再生。第一种是成熟的原代肝细胞，对 肝脏损伤反应迅速，具有单向分化潜能的干细胞样特性，但其并不是真正意义上的干细胞；第二种为 卵圆细胞(ovalcells，OCs)，当广泛损伤发生时，这种定位于胆道系统的OCs将被激活，有学者认为 这是残留在肝内的肝干细胞，可分化为肝细胞和胆管上皮细胞，然而成人肝中卵圆细胞的存在与否和 形态变化仍然有争论；第三种细胞是来源于肝外的干细胞，其可能来自于骨髓、脂肪、脐血、羊水等 其它组织或器官，此类干细胞原本分化命运可能并不是肝细胞，许多研究展示了它们向肝细胞定向诱 导分化的潜能。并且这些来源的细胞相对于前两者而言，突破了伦理学的限制，具有取材方便、免疫 排斥低的特点，正受到许多研究者的青睐。而其中尤为引人注目的是脂肪组织，相对于其它组织，脂 肪组织的取材是无创的，不影响病人的健康，并且数量充足。 2．干细胞向肝细胞分化的策略 不同类型的干细胞向肝细胞的定向分化策略都是基于目前对肝脏发育学的认识以及对啮鼠动物胚 胎的研究，这些研究揭示了一些共性的可能线索。如从肝细胞的诱导发生到成熟的肝细胞生成，再到 成体后肝细胞的修复再生，存在着大量而复杂的信号，它们直接或间接的调控着肝脏发育的转录调控 网络。细胞外刺激信号包括细胞因子、生长因子以及细胞外基质，通过相应的受体或通路调控着干细 胞内的基因转录水平，影响着干细胞的分化命运。因此也有学者直接通过高效表达与肝细胞定向分化 密切相关的转录因子，对于细胞进行基因修饰，从而促进肝细胞的定向分化。目前模拟体内发育环境 的连续信号刺激已经被演示出来。而干细胞的分化调节是如此复杂，各种诱导信号要在空间、时序、 剂量等各个方面达到有效的组合，干细胞分化内部潜在的机制远未完全明了，这也导致了至今仍然没 有统一而确定的分化策略出现。 Esc向肝细胞定向分化的体外策略是采用优化组合拟胚体(embryoidbodies，EBs)形成或直接诱导、 共培养、细胞外信号刺激或基因修饰、富选细胞等方法，最大限度的得到高纯度、足够量的功能性肝细 胞。体内的诱导分化是将进行了一定的体外诱导刺激分化后的ESc直接移植入肝再生或肝损伤动物模型 中。高效诱导、功能性分化、分选富集、大量制备和功能维持是ESc定向分化策略的中心。起初，许多 学者将ESc直接注入动物体内，期望通过肝脏内部提供的微环境直接促进肝细胞定向分化，但结果是产 生致命的畸胎瘤。此后，通过形成EBs后再进行定向诱导分化，利用EBs的三维结构特点，增强细胞相 互作用，促进肝细胞的形成。然而，复杂的三维结构特点同时也诱导了其它类型细胞的分化，这样也导 致了即使进行了后续的定