新型近红外荧光探针MeCy5-OSu用于毛细管电泳分离激光诱导荧光检测生物胺地研究.pdfVIP

傲型近红外荧光探针MeCy5-OSu用于毛细管电泳 分离激光诱导荧光检测生物胺的研究 傅妮娜，王红，张华山， 《武汉大学化学与分子科学学院，武汉430072) 关键词:I- ￡一玻拍酞亚胺梭戊基)-I’一甲基-3,3,3,3一四甲基叫噪碳著-5,5一二磺酸单钾 盐 (MeCy5-OSu):生物胺:衍生;毛细管电泳;激光诱导荧光检测 精胺 (Spm)、亚精胺 (Spd)、腐胺 (put)、尸胺 (Cad)、组胺 (His)、苯乙胺 (Phe)等生物 胺广泛地存在于动植物和微生物中。在细胞中，某些带正电的生物胺阳离子可与带负电荷的核酸、 酶、蛋白质以及细胞功能团相结合而参与 DNA.RNA和蛋白质代谢的调节，从而维持正常的细胞 功能[[lJ。近年来的研究表明，癌症病人的体液和组织中的生物胺水平远高于正常人，这类胺的测定 可作为癌症的检测指标[2)。因此准确灵敏的测定生命体内的痕量生物胺水平具有重大意义。毛细管 电泳由于具有高效、快速、样品量少等优点，成为近几年来广泛使用的一种分离手段。在毛细管电 泳的检测方法中，激光诱导荧光检测是最灵敏的方法之一。因此，.用荧光探针标记生物胺，毛细管 电泳分离，激光诱导荧光检测可达到测定细胞中痕量生物胺的目的。 l一 (￡一玻拍酞亚胺梭戊基)-l’一甲基一3,3,3,3一四甲基叫噪碳普-5,5一二磺酸单钾盐 (MeCy5-OSu)，是我们实验室新合成的一种近红外荧光探针，它以五次甲川花著为荧光团，以N- 玻拍酸亚胺酩为活性基团，能在低浓度下快速、温和地衍生生物胺。其激发和发射波长分别为649nm 和667nm，在这个光谱区，生物样品基体和一些化学杂质的光吸收或荧光强度很小，因而背景干扰 也大大降低[[3J。除此之外，它还具有水溶性好，能与635nm的激光器相匹配等优点，非常适合测 定细胞中的某些痕量胺类化合物。它的结构见图l, -03S S03- CH2(C姚)4CO()一N 图】MeCy5-OSu的结构 在该实验中，我们研究了以McCYS-OSu作为衍生试剂毛细管电泳激光诱导荧光检测生物胺。 衍生条件:试剂用量3X10-5molL-,缓冲溶液pH8.8;反应时间和温度分别为20min和250C，生 物胺浓度2X10-7mol1:1.分离条件:背景电解质为20mmolL-，磷酸和20mmolLSDS的35% 甲 醇溶液，pH=3;分离电压22.5kV，反向加压进行电泳.六个生物胺在18min内达到完全分离。检 出限可达到amol级。 该方法具有灵敏、快速、操作方便等优点，将之用于癌症病人红细胞中的生物胺测定正在进一 步的探讨中。 通讯联系人:张华山 2005年to月 第三届全国徽全分析系统学术会议论文集 湖北武汉 141Name ， ~ ︵ “ 0 二 0 ﹂ 名 ‘ U 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 树 nutes 图2 生物肢的毛细管电泳分离图 1.Spm;2.Spd;M is,4.Cad;5.Put;6.Phe 参考文献: [IJWCTabor,HTabor,Annu.Rev.Biochem,1984,53:749. [21APeng,SShao,XZbang,GZhang,HumanYikeDaxueXuebao.1997,22:59. [3)GPatonay,MDAntonie,Anal.Chem.,1991,63,321A.