乙型肝炎疫苗接种者细胞免疫与体液免疫应答的比较研究.pdfVIP

乙型肝炎疫苗接种者细胞免疫和体液免疫 应答的比较研究 国家“十五”攻关课题组 梁争论 乙型肝炎疫苗免疫后诱导细胞和体液免疫应答，其中体液免疫应答在初次免 疫和加强免疫后的动态早已得到阐明，免疫后产生的保护性抗体可有效预防病原 微生物的感染或发病，实际应用中以抗体阳转率和抗体滴度作为评价疫苗免疫原 性和免疫效果的指标。然而，抗体一般在初免后15—20天时出现，对暴露后接种 需尽快产生免疫保护的疾病，如乙肝和狂犬病等，较晚产生的体液免疫在疫苗保 护中所起的作用有限，近期研究发现接种疫苗，可早期诱导的特异性的细胞免疫， 在乙肝疫苗阻断双阳性母亲高危新生儿母婴传播中起重要作用。 在HTV、HCV疫苗和治疗性乙肝疫苗和新型预防性乙肝疫苗的研究中，诱导 细胞免疫成为关键标志。近来，随着免疫学技术的发展，使定量测定疫苗免疫后 细胞免疫的应答转归成为可能。但是目前尚不清楚疫苗初免／加免后细胞免疫持 续的时间和转归，影响新型预防性和治疗性疫苗的设计和评价。 在效果评价中，目前认为应同时考虑细胞免疫的强弱。然而在实际应用中仍存 在大量问题急需解决，如：1以何种指标评价细胞免疫应答?；2细胞免疫的动态如 何?：目前尚不清楚初免／力口免后细胞免疫持续的时间和转归，测定的最佳时间?；何 种指标可在早期有效检出细胞免疫存在?：何种指标在免疫后稳定出现? 我们对细胞免疫测定的方法学进行了研究，并在此基础上，选择健康成人进 行了乙肝疫苗免后的细胞免疫和体液免疫动态测定，结果如下： 一．方法学研究 进行了不同方法，应用不同淋巴细胞，采用不同刺激物，免疫后不同时间的 比较研究： 1-LUMINEX法测定细胞因子：通过对刺激后细胞培养不同时间的比较，以 刺激后5天测定细胞因子为最佳时间 2． cD+8细胞体外刺激后分泌IFN—r，IL一2，IL．4三种细胞因子的研究，发现测定不 同细胞、不同细胞因子，需选择不同的刺激物(乙肝抗原，乙肝表面抗原表位多 肽，表面抗原混合表位多肽)。 通过对小鼠免疫不同种类乙肝疫苗和抗原后，进行动态观察，得到动物免疫 后细胞免疫的转归数据。 通过以上方法学研究，得到： 1． 细胞免疫测定的适宜时间，小鼠免疫后3—4天即可检测出。 2． ELISPOT方法灵敏度高，适宜于早期测定应答较弱时的细胞免疫反应； 分选CD+4和CD+8细胞后测定细胞因子，可了解辅助T细胞和效应T细胞各自所 起的作用和机制； 3．LUMINEX法测定细胞因子适宜于应答较高的细胞免疫应答，优点在于可 同时测定多个细胞因子，且需样本量少。 二．乙肝疫苗接种者细胞免疫和体液免疫的比较研究 1对象选择： 12例研究对象来自大学生入学健康体检筛选人群，男女各半，年龄范围17—20 岁，经体检均健康(免前测定抗一HCV、抗一HIV、ALT等指标均为阴性)，其中乙 肝感染指标五项全阴10例，8例研究对象随机分为2组，按0，1，2月程序分 别接种国产酵母乙肝疫苗和国产CHO乙肝疫苗(各4例)，余2例作为阴性对照， 在试验进行1月时接种第一针疫苗；乙肝抗体单项阳性2例，分别接种单针酵母 和CHO疫苗，作为阳性对照。 依据伦理学原则，本项研究经过当地医学伦理委员会批准。每个研究对象均 签署知情同意书。 接种疫苗分别为乙肝酵母和CHO疫苗，生产厂家为大连汉信和华北制药金坛公 司，剂型均为10tlg／ml。 2方法： 2．1 IL一4，IL一10，TNF—a5种细胞因子。 2．2细胞分选：PBMC分离和CD+8、CD+4细胞 取试验对象的免疫后抗凝外周全血，经淋巴细胞分离液密度梯度离心分离外 周血单核淋巴细胞(PBMC)后，应用德国MACS自动分选仪分选细胞。 表位多肽刺激后产生的IFN—r，IL一2，IL一4。 结果 1．乙肝疫苗接种者接种三针疫苗后抗体转归 接种疫苗者抗体阳转率二针后显著升高，至三针后3个月时，达90％；抗体 GMT的升高趋势与抗体阳转率相同，至三针后3个月时，抗体GMT在lOOmlU／m1 2．LUMINEX法测定细胞因子： 2．1阴性对照结果： 2例未接种疫苗对照(A6，A7；)，在0-30天的研究期间，五种细胞因子均 未测出(