原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
619
家禽生产与禽病防治专题 0
T040098
表达绿色荧光蛋白重组传染性支气管炎病毒的
拯救及其生物学特性研究
周 生唐梦君1’2戴亚斌1赵宝华1程旭1沈欣悦1
(1．中国农业科学院家禽研究所，江苏扬州225003；2．农业部家禽品质监督检验测试中心，江苏扬州225003)
引言
Bronchitis
传染性支气管炎病毒(InfectiousVirus，IBV)属于冠状病毒科冠状病毒属，其基因组为
不分节段的单股正链RNA，全长约为27．6kb，具有典型的5
7帽子和3’PolyA尾巴结构，至少有10个明显
7
的开放阅读框(ORF)，分别编码病毒的结构蛋白和非结构蛋白。现已确定的ORF的定位次序是5
1a．1b．S．3a．3b．E．M．5a-5b—N．37。3ab、5ab均为病毒编码的非结构蛋白，在IBV感染细胞内均可检测到，
但其功能目前尚不清楚。已有研究表明3ab、5ab编码区的缺失并不影响IBV病毒的复制和致病性。课题
组前期建立了IBVH120疫苗株的反向遗传操作系统，在此基础上，采用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)
定H120．5a／EGFP的生物学特性，探讨IBV作为载体表达异源蛋白的可行性。
材料方法
结果
膜、羊膜等组织中能检测到绿色荧光；拯救病毒能引起IBV感染鸡胚后的特征性变化；经I型卵磷脂酶C
能检测到病毒，但在绒毛尿囊膜等组织中观察不到绿色荧光，进一步测序结果表明插入H120基因组中
的EGFP基因发生缺失。
讨论
本研究通过反向遗传操作技术成功拯救获得了表达绿色荧光蛋白的传染性支气管炎重组病毒
引起感染鸡胚特征性的变化，因此5a基因的缺失并不影响病毒对鸡胚的致病性。已有研究表明，部分外
源基因插入冠状病毒基因组后，重组病毒在传代过程中是不稳定的。本研究也发现H120—5a／EGFP在连
续传代过程中目的基因发生了缺失，因此开发以冠状病毒为载体的外源基因表达系统需要解决外源基因
的稳定性问题。
参考文献(略)
文档评论（0）