水稻条纹病毒和介体灰飞虱互作的相关研究.pdfVIP

大会报告 水稻条纹病毒与介体灰飞虱互作的相关研究 周益军 程兆榜 熊如意 季英华 (江苏省农业科学院植物保护研究所，南京210014) 1 田间灰飞虱带毒研究 了来自不同地区、不同发病田块、不同世代、不同龄次、不同家系及其后代的灰飞虱带毒 情况。结果表明：不同地区灰飞虱带毒率差异显著，轻病区带毒率明显偏低；采集样品田 块水稻发病率与灰飞虱带毒率无必然相关性，带毒率高低可能与原初侵入灰飞虱种群带毒 情况有关；越冬代、第一代和第二代灰飞虱带毒率呈“V”字型结构，暗示田间条件下灰 飞虱带毒状况存在自然衰减和累积效应；灰飞虱体内带毒浓度随着龄次的增长而提高，低 龄虫带毒浓度较低可能是其与无毒虫存活率相似的重要原因。 2灰飞虱与RSV亲和性互作关系及其分子标记研究 对不同灰飞虱家系的带毒率进行追踪观察并对部分家系后代进行重新纯化和进一步追 踪结果显示，灰飞虱与RSV的互作关系可分为4个类群：HA，高亲和性，灰飞虱可以稳 定地经卵传播RSV；MA，中亲和性，灰飞虱可以在一段时期内稳定经卵传播RSV，随着 繁殖代次的增加其带毒率下降较快，重新纯化后短期内可以完全恢复；LA，低亲和性， 灰飞虱可以获得RSV，但不能稳定经卵传播RSV；NA，非亲和性，灰飞虱不能获得和携 带RSV。这是首次对灰飞虱一RSV的互作关系进行明确分类。通过单雌产卵的方法，利 用试剂盒检测灰飞虱亲本及其后代的带毒情况，对江苏13个县、市田间灰飞虱进行亲和 性群体筛选试验，其中灌云、高邮、建湖、武进等地未筛选到高带毒亲和性群体，其他地 区均筛选到高带毒亲和性群体，其中洪泽和盐都等地占有比例较高，分别为占自然种群的 中占有一定比例，是病害流行不可缺少的因素。在构建的高亲和性和非亲和性灰飞虱群体 中，应用RAPD和SPAR分别扩增出1 分子标记的特异性条带。 3 RSV对灰飞虱生活力的影响 利用同一家系的高亲和性灰飞虱的无毒虫与带毒虫，将亲代灰飞虱组合成4个组合： 组合1：带毒雌虫X带毒雄虫；组合2：带毒雌虫×无毒雄虫；组合3：无毒雌虫×带毒 雄虫；组合4：无毒雌虫×无毒雄虫作为对照。研究发现F。代带毒情况只与雌虫有关， 雌虫带毒则后代带毒率为100％。携带RSV的灰飞虱。其对F。代产卵量无明显影响，而 对孵化力有影响，4．个组合中孵化出的一龄幼虫数，组合4组合2组合1与组合3，组 合1与组合3间无显著差异，从中可以看出，亲代带毒减弱后代的孵化力，且推测带毒雄 12 植物保护科技创新与发展 虫对孵化力的影响更大一些。同时研究显示，携带RSV的灰飞虱，其孵化历期延长，并 且F。代幼虫和成虫成活率相对无毒虫组合有所提高。 4 RSV在介体灰飞虱体内亚细胞定位及卵传机制初步研究 应用超薄切片和免疫金标记电镜技术分析了RSV在灰飞虱生殖器官及中肠的分布。 观察结果表明，在卵巢的滤泡细胞中集中分布了大量病毒粒子；在卵壳、卵内以及中肠细 胞上有高密度的免疫金颗粒标记。上述研究结果暗示卵壳中的病毒粒子来自于卵细胞周围 的滤泡细胞，随着滤泡细胞分泌卵壳蛋白时进入卵壳这一过程。 5 RSV编码蛋白在灰飞虱体内的检测及其与CP互作研究 检测灰飞虱体内由水稻条纹病毒(RSV)编码的外壳蛋白CP、病害特异性蛋白SP， NSvc4的互作，为进一步研究水稻条纹病毒与其介体昆虫互作提供有用信息。本研究提取 NS2含量依次降低；用体外原核表达后纯化的蛋白进行了RSV病毒粒子(CP)与SP、 作关系。检测结果为灰飞虱作为RSV的昆虫寄主并且可以在其体内增殖的结论提供了支 持，表达差异表明病毒编码蛋白在介体灰飞虱体内可能存在着一定的协调关系；CP与SP 的互作为前人关于CP与sP可能共同作用于叶绿体进而影响症状的严重度的报道又提供 毒在胞间运动需要CP的辅助提供了佐证。同时利用双向电泳筛选到灰飞虱体内存在一个 Buchnera GroEL蛋白大小相似。 6灰飞虱体内共生菌及与传毒关系研究 chia且雄虫检出率要高于雌虫，但是与是否携带RSV无相关性；对于不同种群的灰飞虱 体内Wolbachia具有极高的同源性，说明不同种群间存在横向传播，同时与白背飞虱、寄 生蜂和其他节肢动物体内的Wolbachia都有很高同源性。