柱亲与介质用于内毒素去除的研究.pdfVIP

/柱亲和介质用于内毒素去除的研究 唐守万，孔 亮，欧俊杰，邹汉法* (中国科学院大连化学物理研究所 国家色谱研究分析中心，大连，116023, E-mail:zouhfa@mail.dlpttjn.en) 内毒素是一类脂多糖类物质，极微量(纳克级)内毒素进入人体就会引起高热，腹泻，血管 扩张，甚至昏厥或死亡。内毒素的去除方法如活性炭、离子交换树脂吸附，酸、碱或氧化剂 化学分解、膜过滤等存在选择性差、样品回收率低的缺点。近年来，亲和色谱[1-5]获得了巨大 成功。因为尽管不同来源的内毒索分子结构千差万别，但其脂质A都含有多个磷酸根，同时其 所含的胺基葡萄糖基与某些特定的基团产生特异性亲和作用。我们以琼脂糖为基质，键合多 粘菌素B，制备了一种用于内毒素去除的亲和介质，考察了内毒素去除的最佳条件。 1仪器和试剂 V-550紫外一可见分光光度计(日本Jasco公司)。 多粘菌素B硫酸盐 (PMB，华美生物工程公司北京分公司);SepharoseCL-4B(Phannacia 公司，瑞典):细菌内毒素国家标准品，洗净内毒素工作标准品 (中国药品生物制品检定所); 细菌内毒素检查用水 (中国湛江海洋生物制品厂);赏三肤试剂盒 (上海伊华医学科技有限公 司)。 2 实验方法 玻璃器具洗净，400℃干烧4h,温度降至室温后使用。塑料用具30%HZq浸泡过夜后， 分别用生理盐水、无热原水洗净，60℃烘干后使用。 考察离子强度、pH,温度对内毒素去除的影响时均采用静态法。取洗净的亲和介质10mg, 加入16Eu/mL的内毒素溶液1mL，振荡2h后，采用擞三肤显色定量法测定样品中的内毒素 含量。pH、温度实验时，内毒素溶液中NaCl的浓度为0.15mol/Lo 3 结果与讨论 3.1NaCl浓度对内毒素去除的影响 25℃时NaCl浓度对内毒素去除的影响见表1。由表1可知，盐浓度由0增加到0.05mol/L 时，内毒素的去除率迅速升高到98.34%;在NaCl浓度为0.05^0.50mol/L时内毒素的去除效 果最佳，去除率大于95%;而当盐浓度增加到2.0.5.Omol/L时，内毒素的去除率又迅速下降 到77.16,68.57%。这是因为亲和配基PMB与内毒素之间的作用主要是疏水与静电作用，而 溶液中盐浓度即离子强度的大小会影响这两种作用，离子强度增大会增强亲和配基与内毒素 之间的疏水作用，同时又会减小两者之间的静电作用。疏水与静电作用的协同作用导致了上 述结果。 表1NaCl浓度对内毒素去除的影响 9 5 ︵ 冰 盐浓度 (mol/L) 去除率 \一\_， ， 门 了 6 I 丫 少 ; J 。 加 0 u 9 0 内 4 0