蚕病检测中免疫学技术的研究和应用.pdfVIP

第四届中国兽药大会——兽医微生物学、兽医生物制品学学术论坛论文集(2012年) 蚕病检测中免疫学技术的研究与应用 鲁兴萌1，蔡顺风1，邱海洪1，孙文静1，何永强3 (1．浙江大学蚕蜂研究所，浙江杭州31 0012) 0029；2．浙江出入境检验检疫局技术中心，浙江杭州31 摘要：本文介绍了有关应用免疫学技术对蚕病进行检测的研究。根据已有研究和养蚕业的特点，认为家蚕微粒子病的 检测是一项非常值得研究的技术。家蚕微粒子病检测的技术根本是解决基于实际应用条件下的灵敏度和特异性问题。 关键词：蚕病；检测；免疫学技术；灵敏度；特异性 病害的检测是医学及兽医学的临床治疗和疾病预防中十分重要的内容，通过检测病原微生物或相关物 质尽早确诊致病因素，是及时采取有效措施的前提。蚕病防控中同样存在该类情况，由此许多研究人员对 蚕病检测技术开展了大量的研究。蚕病检测技术所针对的检测对象主要为非包涵体的病毒和家蚕微粒子虫 (Nosema mori bombycis，简称Nb)孢子。非包涵体病毒的家蚕浓核病毒(Bombyx moriInfectiousFlacherie 和家蚕病毒性软化病病毒(Bombyx Vrius，BmlFV)，由于只有约25nm大小 而无法用光学显微镜进行检测；家蚕微粒子病则由于除№孢子外还有多种形态类似孢子的存在而难于用光 学显微镜进行鉴别u1。 免疫学技术的快速发展为病害检测新技术的研发和水平的提高，提供了重要的理论与技术基础。在医 学及兽医学的临床治疗和疾病预防中，大量基于免疫学技术的检测技术被建立并广泛应用。蚕病检测方面 虽然开展了不少的研究，但在我国由于养蚕业的特殊性和技术实用化(熟化)程度等问题，尚未见生产中 大规模应用的案例。现将该方面的主要研究进行综述，期望为该领域的技术研发和进步提供有益参考。 1 免疫学检测技术的原理简要 解质和固相载体等)等的不同，免疫学诊断技术分为众多的类型。特别是随着抗体标记技术的发展，免疫 学诊断技术的特异性和灵敏度得到明显提高，方法更为丰富。 抗体分为两种类别，其一是将纯化的抗原注射到动物(一般为兔、羊和鼠)体内，刺激动物有机体免 疫活性细胞产生抗体，达到一定的效价后，采血和析出含有抗体的血清(抗血清)。该法制备的抗血清是多 种免疫球蛋白的混和物，故称之为多克隆抗体(针对多种抗原决定簇。PolyclonalAntibody，简称多抗)。 其二是将免疫后小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，通过细胞培养筛选出针对单一抗原决定簇的抗体分泌细 胞株，从而大量生产具有极高特异性的单克隆抗体(Monoclonal Antibody，简称单抗)。用于免疫学诊断 技术的抗体制备主要包括抗原的纯化、免疫和抗体提取。不同的免疫学诊断技术对抗体制备的要求也有所 不同‘2|。 多抗和单抗都可以通过各种酶、荧光素和金银胶体等标记技术或其它凝集技术大幅提高检测灵敏度。 随着新仪器和材料的出现，以及商品化试剂(标记抗体等)的日益增多，抗体与标记技术的组合日益丰富， 操作流程日趋简便。 2基于免疫学技术的研究 2．1 凝集反应技术凝集反应技术在蚕病检测中的应用研究是较早的一种方法，由于抗原与抗体在液体中 很快就可发生肉眼可见(直接或显微镜观察)的沉淀而显得非常简便，可以将待检样本放于载玻片、试管 和低浓度琼脂中加入抗体直接进行，但该方法的灵敏度十分有限。 局科研项目(No．2007IK017) 作者简介：鲁兴萌(1962一)，男，浙江，教授，E-mail：xmlu@zju．edu．cn 一12— mori 在特异性方面，制备家蚕六角形(HC)和四角形(TC)质型多角体病毒(Bombyx Polyhedrosis Nuclear PolyhedrosisVirus，BmNPV)多角体和BmI