温度对葡萄糖氧化酶构象与电催化活性的影响.pdfVIP

温度对葡萄糖氧化酶构象及电催化活性的影响 * * 王倩 ，金娟，陈冬晓，张卉 ，蔡称心 （南京师范大学化学与环境科学学院电化学实验室；江苏省生物功能材料重点实验室，南京，210097， E-mail: zhangh@njnu.edu.cn, cxcai@njnu.edu.cn ） 蛋白质（酶）的正确折叠是行使正常生物学功能的基础，空间构象的异常变化会引起某些疾病 的发生。因此，研究蛋白质折叠的规律及影响因素，有助于进一步了解蛋白质空间构象与其功能的 关系，为寻找合适的治疗方法及开发新的治疗药物等提供重要的理论指导。光谱技术已被广泛地应 用于蛋白质的构象研究。然而，用电化学方法研究蛋白质（酶）构象的报道还很少。 本文用电化学方法研究葡萄糖氧化酶(GOx)构象与其电催化功能的关系。通过正负电荷间的静电 作用将 GOx 固定到单壁碳纳米管(SWNTs)表面，形成 GOx-SWNTs 复合体；将 GOx-SWNTs 复合体 修饰到玻碳(GC) 电极表面形成 GOx-SWNTs/GC 电极。用二维红外光谱(2D IR)研究温度对 GOx 构象 的影响；以单羧基二茂铁(FcA)为电子媒介体，用循环伏安法研究不同温度时 GOx 的电催化活性及 构象与酶催化活性的关系。 图 1 中的曲线f 是 SWNTs/GC 电极在含 10 mmol/L葡萄糖和 0.5 mmol/L FcA 的0.1 mol/L PBS (pH 8.2)中 30 º Ｃ时的循环伏安图，图中出现一对良好的氧化还原峰，这对氧化还原峰对应于 FcA/FcA+ 的电化学反应。氧化峰电位为 320 mV ，还原峰电位为260 mV ，峰电位差ΔEp 为 60 mV。曲线 a 是 GOx-SWNTs/GC 电极于 30º Ｃ时在含 10 mmol/L 葡萄糖和 0.5 mmol/L FcA 的 0.1 mol/L PBS (pH 8.2) 中的循环伏安图，与曲线 f 相比，其氧化电流急剧增加，而还原峰完全消失了，这是稳态电催化反 应的典型特征。随着温度的升高，GOx-SWNTs/GC 电极对葡萄糖氧化的电催化电流(icat)逐渐降低， 如曲线 b 、c、d 和 e 所示。温度达到 70º Ｃ时，GOx-SWNTs/GC 电极的电催化活性几乎消失。这些 结果说明随着温度的升高，GOx 的催化活性降低，可能因为温度的升高影响了 GOx 的空间构象，进 而影响了其电催化活性。 30 25 a 20 Α μ b / 15 i 10 c 5 d