鼠李糖乳杆菌生物发酵的研究.pdfVIP

鼠李糖乳杆菌生物发酵研究 张刚 奚震 叶樱 (天津市工业微生物研究所 天津 300221) 摘 要:以鼠李枪乳杆菌为出发菌种，以乳清粉和青裸水解液为发酵原料，同时在培养基 中辅以徽童元紊，维持 pH6.0于 37℃发酵 48~52h，最终发酵液 中菌体生物I达 2X 109CFU/mL. 关扭词:民李格乳杆菌;胞外多糖;生物合成;化学特性 乳酸菌作为功能性微生物在人体健康生活中起着极其重要的作用，其中保加利亚乳杆 菌、嗜热链球菌为第一代益生菌的代表。上世纪七八十年代欧洲和日本相继推出第二代乳酸 菌双歧杆菌、嗜酸乳酸杆菌发酵制品，其主要功能体现在这些乳酸菌能够克服人体胃酸和胆 汁对乳酸菌的破坏，并能在人体肠道中短暂定植上。但由于厌氧程度较高，在生产和推广上 都有一定难度。 1983年SherwoodGorbach和BarryGoldin教授率先从人体中分离出了一株新型功能性 乳酸菌Lactobacillusrhamnosus，即鼠李糖乳杆菌。该乳酸菌具有较强功能性和较长的肠道 定植时间，被誉为第三代益生菌，已在国外一些发达国家得到应用，如芬兰维利奥公司的主 要代表产品LGG等。以鼠李糖乳杆菌发酵的食品及保健品在欧美及亚太地区30多个国家得 到广泛推广，每年销售额达25亿美元。目前瑞典、新西兰、加拿大、台湾地区等也都相继 分离出具有自主知识产权的鼠李糖乳杆菌菌株。 目前国外关于鼠李糖乳杆菌生物学特性、功能及作用机理等方面的研究报道多达200余 篇，是所有益生菌中最多的，而且其中一些次生代谢产物如鼠李糖乳杆菌胞外多糖 (Lacto- bacillusrhamnosusEPS)已引起了国际众多学者的高度重视。其中新西兰Massey大学、瑞 典Lund大学和加拿大Laval大学的科学家已经在用LactobacillusrhamnosusEPS治疗癌症 和提高人体免疫力等方面取得了众多科研进展。而我国关于鼠李糖乳杆菌胞外多糖的提取及 在应用研究方面仍然处于空白。 鼠李糖乳杆菌EPS作为一种新型、高效、安全的生理功能因子，将对治疗庙症和提高 人体免疫力具有重大理论研究意义和实际应用价值。 1材料与方法 1.1 材料与仪器 1.1.1 菌种 鼠李糖乳杆菌:天津市工业微生物研究所菌种保藏中心从健康人体中分离筛选，该菌株 经 “中国工业微生物菌种保藏管理中心”鉴定为 “鼠李糖乳杆菌Lactobacillusrhamnosus, 菌种鉴定报告号为 (2002)CICC检字第16号。 1.1.2 培养基 MRS培养基:蛋白陈log,葡萄糖20g,酵母浸膏5g，乙酸钠5g，柠檬酸氢二胺2g，牛 80 肉膏log,Tweern-801mL,K2HP042g,MnSO4、4H200.25g,蒸馏水1000mL,pH7.2. AS培养基:大豆蛋白陈5g，胰陈5g，微量盐溶液40mL,酵母膏log，葡萄糖log, 半胧氨酸盐0.5g,蒸馏水1000mL,pH7.2. BL培养基:西红柿浸出液400mL，蛋白陈15g,酵母浸膏6g，肝浸液45mL,葡萄糖 20g，可溶性淀粉0.5g,NaCI5g,Tweern-801mL,L-eys0.5g,蒸馏水1000mL,pH7.20 1.1.3 主要仪器设备 LRH-250A型生化培养箱:广东省医疗器械厂 GBR型发酵罐:海化生物工程有限公司 贝克曼高速冷冻离心机:美国 pHSC型精密pH计:梅特勒 高效液相色谱仪:日本日立 NDy79型旋转式勃度计:上海同济大学仪器厂 真空旋转蒸发器:上海医械专机厂 721分光光度计:上海第三分析仪器厂 层析柱:上海锦华实验器材厂 1.2 方法 1.2.1 鼠李糖乳杆菌筛选 取健康人新鲜粪便，放人无菌收集袋，充人CO:后混匀，稀释液涂布于MRS,LBS和 BL培养基上进行选择培养，37℃厌氧培养48一72h，根据菌体形态和菌落特征挑取可疑 菌株。 1.2.2 鼠李糖乳杆菌生理生化试验 将上述分离筛选菌株做各种糖代谢、接触酶、明胶液化、生长温度、好氧、厌氧实验及 代谢产物分析等实验确定该菌属性。 1.2.3 鼠李糖乳杆菌生长曲线的测定 取对数期的鼠李糖乳杆菌培养液，按5%的接种量接人不同培养基的三角瓶发酵液中， 37℃恒温培养，定期取发酵液分析鼠李糖乳杆菌