一种基因工程菌代谢丙酮酸能力的检测方法与在酶工程中的应用.pdfVIP

一种基因工程菌代谢丙酮酸能力的检测方法与在酶工程中的应用.pdf

  1. 1、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。。
  2. 2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  3. 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
  4. 4、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
  5. 5、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们
  6. 6、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
  7. 7、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
第二部分新型酶制剂及其应用 一种基因工程菌代谢丙酮酸能力的检测方法 及在酶工程中的应用 王成华1蒙建宗2杜奇石2韦航2李晓明1 1南宁邦尔克生物技术有限责任公司 广西南宁530003 2广西大学生命科学与技术学院广西 南宁530004 【摘要】丙酮酸是生物体内物质代谢的枢纽,与之相关的酶及代谢途径成为现代基因工程,特别是代谢工程研究的 关键,建立简便而有效的检测方法成为丙酮酸代谢相关工程茵研究的前提。本研究基于丙酮酸与2,4-二硝基苯肼发生 羰基化反应的原理,建立了优化的丙酮酸检测体系;在研究了常见物质对所建检测体系的影响的基础上,将之推广到发 酵产物体系的检测中;利用含有丙酮酸甲酸裂解酶基因的工程茵,进一步验证了检测方法的可行性。 【关键词】丙酮酸 2,4一二硝基苯肼 基因工程茵 丙酮酸甲酸裂解酶 随着化石资源的日益枯竭和环境污染问题的 日益加剧,以微生物或酶为生物催化剂完成的生 蛐恤r叩韭蜴鼬 物催化为核心的工业生物技术,作为工业可持续 发展最有希望的技术得到了长足的发展。特别是 伴随着现代分子生物学技术进步和后基因组时代 岬刊R~㈣一 的到来,现代酶制剂的研究开发充分借助于分子 酶工程对酶本身的特性进行改造,借助于代谢工 图1大肠杆菌中丙酮酸相关代谢途径 程对制备酶制剂的宿主菌进行设计,以从质和量 ldhA:lacticacid dehydrogermse: oxidaseB: 上根本性提升现代酶制剂工业。 PoxB:pyruvate 丙酮酸作为糖酵解途径的最终产物,可通过 PDH:Pyruvatedehydrogenase: 乙酰辅酶A和三羧酸循环实现体内糖、脂肪和氨 Pfl:Pyruvateformate—lyase. 基酸间的互相转化,成为三大营养物质代谢联系 从丙酮酸量的变化或相关酶活的测定出发, 的枢纽。丙酮酸代谢能力的高低对引导所构建的 建立简便而高效的检测丙酮酸代谢能力的方法, 代谢工程菌代谢流的流动,提高物质与能量转移 是丙酮酸代谢相关酶酶制剂研发和相关代谢工程 的效率和积累目的代谢产物具有核心的决定作 菌株构建的前提。目前,已经建立的丙酮酸检测 用。借助于分子定向进化技术或代谢工程技术, 方法主要有以下几种:高效液相色谱法,酶耦联 对生物体内与丙酮酸代谢相关的酶及代谢途径进 法,紫外一可见分光光度法等。然而,试剂价格或 行优化设计是达到提高丙酮酸代谢能力的理想手 者特殊设备的要求限制了上述实验方法的普遍开 段。例如,大肠杆菌中丙酮酸代谢相关酶与代谢 展,有必要建立一种简便而又有效的检测工程菌 途径如图l,在大肠杆菌基因工程菌的构建中,为 中丙酮酸代谢能力的方法。 了引导丙酮酸的代谢流,常针对PDH、LdhA、PoxB 本研究基于2,4

文档评论(0)

bb213 + 关注
实名认证
文档贡献者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档