应用基因芯片技术的研究多囊卵巢综合征患者种植期子宫内膜的差异表达基因.pdfVIP

度的睾酮处理组比较6PO．05；与其他各浓度的睾酮处理组比较。PO．05；与其他各浓度的睾酮处理组比较 ‘PO．05；…未取得数据 应用基因芯片技术研究多囊卵巢综合征患者种植期 子宫内膜的差异表达基因 北京大学第三医院生殖医学中心 100083王丽娜乔杰 PCOS是生育年龄妇女常见的一种复杂的内分泌及代谢异常疾病，以雄激素过多及长期 无排卵为特征。PCOS患者经促排卵治疗后，有卵泡发育及排卵，但妊娠结局仍不尽如人意， 那么是否在胚胎种植水平上存在问题呢?先前关于PCOS子宫内膜容受性也进行了一些研 究，但受研究手段的限制，多是研究一个或几个因子对子宫内膜容受性的作用，存在片面性 和局限性，不能得到一致认同。基冈芯片技术的发展使在基因纽范围内研究子宫内膜容受过 程成为可能，从而可以高通量地研究所有与最终生物学表型相关联的基因表达变化，以期寻 找在内膜容受性过程中发挥关键作用的基因。本研究对PCOS种植窗口期子宫内膜及正常对 照组种植窗口期子宫内膜的全基因组进行检测，寻找PCOS与正常对照相比，子宫内膜的差 异表达基因，以期发现PCOS患者子宫内膜容受性变化的机制，探讨这些变化与胚胎种植的 可能关系。 1．材料和方法 1．1病例选择 1．1．1入选标准 PCOS患者及正常对照组均无高血压、糖尿病等遗传病家族史，也无其他内科合并症及 并发症；所有入选者超声检查均无生殖器异常发现，全身体格检查无异常发现，临床证实未 妊娠，不合并子宫内膜异位症及其他系统疾病；正常对照及PCOS组入选患者均签署知情同 意书。 正常对照组：选择因男方因素不孕就诊于北京大学第三临床医院生殖中心的非PCOS 患者7例(超声无PCo征，平素月经规则，无多毛和／或瘦疮或脂溢性皮肤，血清雄激素水 平在正常范围内)。PCOS组：选择就诊的PCOS患者9例，其中6例为因输卵管梗阻或男 方因素行体外受精，促排卵治疗后发生卵巢过度刺激综合征(ovaranhyperstimulated syndrome，OHSS)者，3例为自然周期监测排卵，发生卵泡黄素化不破裂(1uteinizedunruptured t01 、 liCle，LUF)者。 1．1．2 控制性超促排卵方案及取卵数 PCOS发生OHSS的6例患者，均为阿拉瑞林短方案，阿拉瑞林l50ug，月经第二天起 始，果纳芬2支或果纳芬3支，月经第三天开始，应用Gn总量：果纳芬19支，HMGl0．3 支。平均取卵32．7枚。 1．2取材方法及标本处理 1．2．1 基因芯片实验标本 所有患者均知情同意后行阴道超声监测卵泡发育，分为正常对照组及PCOS组。正常对 照组7例患者均为自然周期，于月经周期第8天开始行阴道超声监测排卵，于排卵后6天取 子宫内膜。PCOS组中3例为因输卵管因素行IVF—ET，发生中一重度卵巢过度激综合征 (ovarianhyperstimulationsyndrome，OHSS)未移植胚胎者，于取卵后6天取子宫内膜；3例 为自然周期监测排卵，发生卵泡未破裂黄素化(1uteinizedunrupturedfollicle，LUF)者，阴道 超声观察卵泡形态特征，结合宫颈粘液评分及血LH、E2、P水平测定，于确定LUF日起6 天取子宫内膜。 1．2．2验证实验标本 IVF．ET治疗过程中因发生OHSS不能行胚胎移植的PCOS患者3例(其中男方冈素2例， 输卵管因素l例)，于取卵后6天取子宫内膜。 160 1．2．3取材方法 患者取膀肮截石位，常规消毒，于无菌条件下采取子宫内膜，部分标本进行组织病理学 检查，部分标本以生理盐水漂洗，洗去其中混杂的血液后迅速转移至液氮中保存备用。所有 标本均经患者同意用于科学研究，并经北京大学医学部病理教研室专人阅片，符合分泌中期 子宫内膜表现。 1．3诊断标淮 PCOS诊断按新的ESH服从SRM标准根据G01an等对卵巢过度刺激综合征的分度分为 分为轻、中、重度3根据超声声像学特点结合宫颈粘液评分及血清IH、E2、P水平诊断LUFt33。 1．4实验方法 1．4．1基因芯片实验方法：提取RNA，合成cDNA并纯化，寡核苷酸芯片及实验操作方 法由博奥公司提供。 1．4．2Realtime PCR System指导操作手册， PCR，用溶解曲线来监测产物中