热带牧草种子抗真菌蛋白筛选初报.pdfVIP

广东农业科学 2008年第 11期 89 热带牧草种子抗真菌蛋白筛选初报 吴坤鑫，张秀春 ，陈雄庭 f中国热带农业科学院热带生物技术研究所，海南 海 口 571101 摘 要：利用琼脂纸片扩散法对 262种热带牧草种子水提取物进行抑立枯丝核菌活性试验 ，结果表明：其中有 24种 热带牧草种子的水提取物对立枯丝核菌菌丝生长具有显著的抑制作用，它们分属金合欢属、朱缨花属、蝶豆属 、银合欢属、 决明属和灰毛豆属 ；水提取物进一步用链霉蛋 白酶E消化处理，发现只有蝶豆种子提取物 中存在抗真菌蛋 白。 关键词 ：热带牧草 ；立枯丝核菌 ；种子蛋白；抗真菌蛋 白 中图分类号 ：s482．2*92 文献标识码 ：A 文章编号 ：1004-874X 2008 11—0089—03 Preliminarystudy0nscreeningtheantifungalproteinsfrom seeds n - - l ^ 0ttropicaltorages WU Kun—xin，ZHANGXiu—chun，CHEN Xiong-ting InstituteofTropicalBioscienceandBiotechnology,cATAS，Haikou571101，China Abstract：Extractsof262kindsoftropicalforageseedswerescreenedforantifungalagentswithactivityagainsttheplant pathogen Rhizotonia solaniKiihn．Many seed extractsshowed inhibitory activity againstthefungitested．High antifungal activitiesweredetectedintheseedsof24speciesingeneraAcacia,Calliandra,Clitoria,Leucaena,SennaandTephrosia．Only theseedextractofClitodaternateaLinn．wasshowntocontainantifungalproteins． Keywords：tropicalforages；RhizotoniasolaniKtihn．；seedprotein；antifungalproteins 植物的生长随时面临微生物的侵袭 ，其中种子在 物源杀菌剂奠定基础。 萌发和生长过程中直接受到土壤有害微生物 的伤害。 1材料与方法 在与病原微生物f包括细菌、真菌和病毒 共 同进化 的 过程 中，植物逐渐形成一系列复杂而行之有效的保护 1．1试验材料 机制来抵御病原微生物的侵染。研究表明，植物具有类 供试的262种热带牧草种子 由国际热带农业研究 似于哺乳动物非特异的先天性免疫 innateimmunity 体 中心 Centro InternaeionaldeAgricuhuraTropical， 系¨1]。植物体 内产生多种具有抗菌或杀虫活性 的次生代 CIAT 的遗传资源中心提供 ，距瓣豆立枯丝核菌由 谢产物 ，包含生物碱类 、类黄酮类 、萜烯类 、甾体 、酚类 CIAT的植物分子病理实验室提供 ，链霉蛋 白酶 E 和独特的氨基酸及多糖等圜。近年来 ，许多在植物防卫 fpronaseE，P一69111为 Sigma公司产品。 体系 中起重要作用的抗菌蛋 白和多肽逐渐被发现并被 1．2 试验方法 加 以利用 。 1_2．1种子蛋 白溶液 的提取 分别取 3g种子进行表 本试验研究了262种热带牧草种子水提取物对距瓣 面消毒 ，在 70％乙醇 中浸泡4min、2．5％次氯酸钠 中浸 ~ CentrosemapubescensBenth 立枯丝核菌 Rh~zoctoma 泡 15min，然后用灭菌蒸馏水漂洗 6次；用无菌小刀 solaniKiihn． 的抑菌活性 ，以期筛选 出具有较强抑菌 切破种子种皮后 ，将种子置于 30mL无菌蒸馏水 中， 活性的抗真菌蛋白和次生代谢产物 ，为进一步开发植 4cc下浸泡过夜 ；用组织捣碎机对种子进行匀浆 ，并充 分研磨，然后用 3层无菌纱布过滤去渣 ．液体在 4℃下 收稿 日期 ：2008—07—20 以 12000r／rain离心 20min，去除上层油脂 ，下清液经 基金项 目：中国热带农业科学院科技基金项 目 Rvkj0004 0．22 m微孔滤膜 Millipore公司产品 过滤后作为种 作者简介 ：吴坤鑫 1969—1，男．博士，副研究员，E—mail：kun 子蛋 白粗抽提液 。粗抽提液经冷冻干燥后溶解于 3．0 xinwu@ya