天然水蛭素冻干粉对小鼠生殖细胞的致突变作用的研究.pdfVIP

第七届中南地区实验动物科技交流会论文汇编 动物实验 天然水蛭素冻干粉对小鼠生殖细胞的致突变作用研究 梁坚，王彦武，李风文，张陆娟，覃辉艳，马宇燕，梁惠莉，苏爱荣， (广西牡族自治区疾病预防控制中心，广西南宁530021) 【摘要】目的：研究不同剂量的天然水蛭素冻干粉对小鼠生殖细胞的致突变作用，为其毒理学安全性评价 提供依据。方法：采用小鼠精子畸形试验和小鼠显性致死试验，观察天然水蛭素冻干粉对小鼠生殖细胞致突变 作用的影响。结果：小鼠精子畸形试验未见导致精子畸形和畸形率增高；小鼠显性致死试验3个剂量组雌鼠 的受孕率与蒸馏水对照组比较无显著性(PO．05)；早期和晚期胚胎死亡率均无明显增加，与蒸馏水对照组比较 无显著性(PO．05)，无剂量反应关系。结论：天然水蛭素冻干粉对小鼠生殖细胞无致突变作用。 【关键词】天然水蛭素冻干粉：显性致死：致突变 天然水蛭素(hirudin)是从水蛭唾液提取分离得到的一种多肽，是迄今发现的活性最强的 特异性凝血酶抑制剂。其抗栓抗凝作用优于传统抗凝药肝素，具有广阔的应用前景n3。本文采 用小鼠精子畸形试验和小鼠显性致死试验，研究天然水蛭素冻干粉对小鼠生殖细胞的致突变作 用，为其毒理学安全性评价提供依据。 1 材料和方法 1．1 材料 1．1．1 天然水蛭素冻干粉 由南宁市某科技有限责任公司提供，每5009粉含有1．59纯水蛭 素冻干粉(相当于25000AT—U)，其余为辅料成分(甘露醇)。批号为2005．07．18。室温保存。 1．1．2 实验动物及环境：清洁级健康昆明种小鼠，由广西医科大学医学实验动物中心繁殖， 验动物室温度：22～25℃，相对湿度：55-～70％。 1．1．3 阳性物环磷酰胺上海华联制药有限公司产品。 1．2 方法‘羽 1．2．1 精子畸形试验清洁级昆明种健康雄性小鼠50只，体重26～35g，随机分为5组， BW mg／kg 3个剂量组。另设一个阴性对照和一个阳性对照(环磷酰胺 40mg／kgBW)。用蒸馏水将样品分别配成500、250和125mg／mL浓度，然后按0．4mL／209BW的 容量给相应剂量组动物灌胃。阴性对照组灌给蒸馏水，阳性对照组灌给环磷酰胺溶液。每天灌 胃一次，连续5d。于首次给受试物后的第35d颈椎脱臼处死动物，取两侧附睾的精子涂片，经 固定和染色后在显微镜下观察，每只动物计数完整精子1000个，计算精子畸形率。 1．2．2 显性致死试验用清洁级昆明种健康小鼠，雄性75只，体重36～40g，雌性900只， 体重30～35 要求‘21，天然水蛭素冻干粉共设10000、5000和2500BW3个剂量组。另设一个阴性对 mg／kg BW)。用蒸馏水将样品分别配成500、250和125 照组和一个阳性对照组(环磷酰胺40mg／kg mg／mL 浓度，然后按0．2mL／lOgBW给相应剂量组的雄性小鼠灌胃。阴性对照组灌给等容量的蒸馏水， 阳性对照组腹腔内注射等容量的环磷酰胺溶液。每天一次，连续6d。然后按雌雄鼠2：1比例 476 动物实验 第七届中南地区实验动物科技交流会论文汇编 同笼交配6d，取出雌鼠另行饲养。雄性鼠体息一天后，再以同样数量的另一批雌鼠同笼交配， 如此共进行6批。以雌雄鼠同笼日算起，第17d用颈椎脱臼法处死雌鼠后，立即剖腹取出子宫， 仔细检查，计数，分别记录每一雌鼠的活胎数，早期死亡胚胎数与晚期死亡胚胎数。计算受孕 率、总着床数、早期和晚期胚胎死亡率。 1．3 统计学方法 采用卡方检验，单因素方差分析进行统计分析。 2 结果 2．1 小鼠精子畸形试验结果见表1，天然水蛭素冻干粉各剂量组的精子畸形率与阴性对照组比 较，差异均无显著性意义(PO．05)，且无剂量一反应关系，表明天然水蛭素冻干粉对小鼠精子畸 形率无明显影响作用。 表1 天然水蛭素冻干粉对小鼠精子畸形的影响(X±s) ·+PnDJ，与阳性对照组比较。 2．2 显性致死试验结果见表2，阳性对照组(环磷酰胺)1至5周雌鼠的受孕率和总着床数明显 低于蒸馏水对照组，2至4周雌鼠的受孕率与蒸馏水对照组