胚胎中脑神经干细胞的培养及分化条件探讨.pdfVIP

重庆医科大学学报2015年第40卷第 1期 (JournalofChongqingMedicalUniversity2015．Vo1．40No．1】 DOI：10．13406／j．cnki．cyxb．000369 胚胎中脑神经干细胞的培养及分化条件探讨 晋贞超 ，邓小兰 ，刘品月 ，袁 莉t，姜 蓉 ，王 健 ，王亚平 ，郑 敏 (1．重庆医科大学干细胞与组织工程研究所干细胞研究平台，重庆 400016； 2．重庆医科大学附属第二医院神经内科，重庆 400010) 摘【 要】目的：探讨神经干细胞 neuralstemcells，NSCs)的培养方法以及各种条件对NSCs生长状况的影响。方法：取 SD大鼠 胚胎中脑 ，在含细胞因子碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor，bFGF)和内皮细胞生长因子(epidermalrgowth factor，EGF)的无血清培养基中培养扩增，得到的神经球用神经巢蛋白nestin抗体鉴定和 5一溴脱氧尿嘧啶核苷 (5一bromo一2一de— oxyuridine，Brdu)掺入检测增殖能力。血清诱导分化后用免疫荧光做星形胶质细胞酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein，GFAP) 和神经元特异性Ⅲ型微管蛋白(neuron—specificclassm 13一tubulin，13一nl—tublin)的双标检测。研究进一步观察了细胞因子bFGF 和 EGF单用及合用对克隆形成数量的影响及不同接种密度和白血病抑制因子 (1eukemiainhibitoryfactor。LIF)对细胞生长的影 响。结果：神经球 nestin免疫荧光表达显示强阳性；Brdu掺人实验显示神经球细胞具有很好的增殖能力；分化后免疫双标结果 得到了GFAP(68．324-5．7O)％和 p—ill—tublin(21．65-43．40)％的阳性表达；当2种因子同时存在时细胞克隆数量优于单因子作 用组(P0．05，与EGF组比较 ；P0．叭，与bFGF组比较)；与对照组比较LIF作用组细胞数量明显增多( 2630．114，P=-O．000)； 细胞接种密度对神经球的数量有明显影响(F=155．100，P=-0．001)，在 (0．5～16．0)x10s个／ml密度范围内，神经球数量随着接种密 度增加而增加。结论：bFGF和 EGF2种细胞因子对NSCs的生长是必须的；长期传代过程中LIF能促进NSCs的生长；NSCs生 长有密度依赖性。但接种密度应该控制在适宜范围内。 【关键词】神经干细胞；细胞培养；分化；白血病抑制因子 【中图分类号】Q254；Q246 文【献标志码】A 【收稿 日期】2013—08—29 InvestigationOnculturalconditionsOfneuralstem cellsfrOm embryonicm Iabraln JinZhenchao，DengXiaolan，LiuPinyue，Yuan ，JinagRo ，WangJina ，WangYaping，ZhengMin (1．InstituteofStemCellsandTissueEngineedng，ChongqingMedicalUniversity； 2．DepartmentofNeurology，theSecondAffiliatedHospital，ChongqingMedicalUniversity) A【bstract]Objective：Toinvestigatetheculturalconditionofneuralstemcells(NSCs)fromembryonicmidbrain．Methods：Midrainsof embryonicSDrice(12．5d)wereused．Cellsweremaintainedandexpandedinthemediumwithserum—freesupplementcontaining basicfib