电击法介导的人参大片段DNA转化灵芝原生质体的研究.pdfVIP

特 产 研 究 SpecialWildEconomicAnimalandPlantResearch 21 文章编号：1001—4721(2015)01—0021—08 电击法介导的人参大片段 DNA转化灵芝原生质体 的研究 朱文静，马飞，孙春玉，蒋世翠，李珊珊，张美萍，王义※ (吉林农业大学生命科学学院，长春 130118) 摘要 ：为探讨灵芝原生质体电击转化的最佳条件 ，以人参大片段 DNA(80kb)为材料，通过电击转化法 ，将其转入6d菌龄的灵芝 原生质体中。使用2mm电击杯的最佳转化条件为平均外加电场 861．34V、大片段DNA：原生质体为1：4；PCR检测结果显示，载 体左区699bp处和右区397bp处电泳检测结果均显示有 目的条带，初步判断人参大片段 DNA已经转入灵芝原生质体中；镜检 发现 ，转化子的菌丝分枝少，仍然存在锁状联合，菌丝体边缘更致密、整齐且生长速度更快，灵芝酸含量增高。 关键词：大片段 DNA；模式真菌；电击转化法；灵芝原生质体 中图分类号：S567．5 1．0353 文献标识码：A StudyontheElectroporation--mediatedTransformation ofLargeDNA FragmentofPanaxGinseng intoProtoplastofGanoderma lucidum ZHUWen—jing，MAFei，SUNChun—yu，JIANGShi—cui， LIShan—shan，ZHANG Mei—ping，WANG Yi※ (CollegeofLifeSciences，JilinAgriculturalUniversity，Chnagchun130118，China) Abstract：Thisstudyusedthelargefragmentof80kbDNAfrom Panaxg／nsengasexperimentalmaterialstofindouthteoptimum conditionsof Electroporation—me~ edtransformation．Themostsuitableageof C~／／／ode／7z／aluc／dum forhtetransformationwere6d；Th ebestvoltagewas 861．34Vwhenhteelectrodespacingwas2mm ；Th emostsuitableproportionbetweenlargefragmentsandpmtoplastwas 1：4；Theexpected bandswhichwereconsistentwiththeleft(699bp)andright(397bp)flankingsequencesweYeofund，whichpreliminarilypmvedhtathtelarge fragmentDNAhadbeentransofrmde intoC,att／~ T／rtaluc／dum ；Th emyceliaofpositivetransofrmationstillhadhteclamp—connectionnadless branchesthanhteoriginalones．Themyceliaofhtetransformatsgrewfasternadhtemarsinwasdenser．Th egnaodericacidcontentswere in— creased． Keywords：largefragmentDNA；patternsof fungi；electricshockmehtod；Ganodermahtc／dum protoplast 灵芝(Ganodermaluc／dum)属于真菌界 (Fu )担 以成为菌类作物的模式菌_3]。丝状真菌遗传转化的 子菌门(Basidiomycota)伞菌纲(Agarieomycetes)多孔菌 方法有 CaC12一PEG法、醋酸锂转化法、基因枪转化 目(Polyporales)灵芝科 (Ganodermataeeae)灵芝属 法、农杆菌介导转化法和电击转化法等 j。电击转 (C,anoderma