羊栖菜多糖经Ca2%2b通路对S180荷瘤小鼠红细胞膜功能影响.pdfVIP

羊栖菜多糖经Ca2+通路对S埘荷瘤小鼠红细胞膜功能的影响 季宇彬，汲晨锋，王狲，李杰女 (国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心哈尔滨150076；哈尔滨商业大学生命科学与环境科 学研究中心哈尔滨150076) 【摘要】目的分析羊栖菜多糖经Ca2+通路对$150荷瘤小鼠红细胞膜功能的影响．方法建立肿瘤动 物模型，分高、中、低剂量腹腔给予羊栖菜多糖7天，采集红细胞，制备红细胞悬液，运用激光共 能，这可能是羊栖菜多糖抗肿瘤作用机制之一． 【关键词】羊栖菜多糖；红细胞膜；Ca“ 1 前言 羊栖菜Sargassum 习称“小叶海藻”，又名海大麦、海茜菜、大麦菜、破网、胡须泡、海菜芽、鹿角尖等，为褐藻门 马尾藻科植物，在我国辽东半岛、山东、浙江、福建、广东浅海域均有生长，日本和韩国也有生长 【l】 羊栖菜作为一种经济海藻，不但具有丰富的营养价值，而且具有显著的医学功用堙1。现代药理 研究表明，羊栖菜多糖具有抗肿瘤作用，还有增强免疫，清除荷瘤小鼠体内自由基、抗脂质过氧化， 可使荷瘤小鼠生存时间显著延长。本文在前期研究基础上，从红细胞膜功能角度探讨羊栖菜多糖抗 肿瘤作用机制，特别是对红细胞内[cd+]变化、膜电位的考察研究，国内尚未见报导。 2 实验部分 2．1材料、仪器及试剂 2．1．1药物及试剂由哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心提供的羊栖菜多糖(SFPS)，多 津化学试剂有限公司)；Fluo一3／A^l(美国MolecularProbe公司)；蛋白酶水解抑制剂对甲苯磺 建成生物公司) 2．1．2仪器低速离心机(LD4-2A型，北京离医用心机厂)；电热恒温水浴锅(北京长安科学仪器厂)； 第三仪器厂)；EPICS-XL流式细胞仪(美国Beckman) 2．1．3实验动物及瘤株昆明种小鼠，体重20±2．0g，雌雄各半，由哈尔滨医科大学动物实验中 心提供：S180(肉瘤)购自黑龙江省肿瘤医院。 2．1．4小鼠肿瘤模型的建立 将接种后7天生长良好的S180小鼠，颈椎脱臼处死，固定于蜡版上，腹部皮肤消毒后，用高温 消毒过的注射器抽取腹水，放入无菌容器内，置冰块中保存。另取小量腹水，置于加有肝素的试管 中，作为观察细胞形态及细胞记数用。将注射器中剩余的腹水，滴于载玻片上，推片，瑞氏染色， 并进行细胞分类记数，其中癌细胞数为97％以上方可使用。腹水用无菌生理盐水按l：4稀释，作右 前肢腋下部位皮下接种0．2ml。 2．1．5实验分组、给药剂量及途径 209 小鼠随机分为6组，每组10只。分别为实验组：SFPs高、中、低剂量组；阳性对照组：5一FU 组；阴性对照组：生理盐水组；正常对照组。高、中、低剂量组剂量分别为40mg／(kg．d)、20mg／(kg．d)、 10mgl(kg．d)，阳性对照组剂量为25mg／(kg．d)，阴性对照组和正常对照组均给予相同体积的生理 盐水。于接种24h后开始ip给药，每只小鼠0．2ml／次，每天1次，连续7d。停药24h后眼球 采血(用肝素抗凝)。 2．2实验方法 2．2．1羊栖菜多糖对St∞荷瘤小鼠红细胞[C矛+]的影响 7．4PBS，3000 新鲜血液加3倍体积0．1mol／1，pH rpm离心5min，洗涤4次。准确吸取红 u 细胞沉淀100弘l，PBS定容至5ml，吸取定容后血液100l，PBS定容至2ml，即得所需红细 II II IIL 胞悬液。准确吸取红细胞悬液100l，加5001无钙台式液，200 Fluo一3／埘(用DMSO溶 II min，3500 解，再加无钙台式液，终浓度为4 g／m1)，37℃避光染色120 rpm离心10min，弃上 u nm， 清液，加3001无钙台式液，充分吹散细胞，置于盖玻片上，上激光共聚焦检测。激发激光488 Pirdlole500