利用宏基因组技术定向筛选抗生素产生菌方法学建立.pdfVIP

利用宏基因组技术定向筛选抗生素产生茵的方法学建立 栗若兰，郑智慧，张华，路新华，贺建功 华北制药集团新药研究开发有限责任公司 微生物药物国家研究工程中心，河北石家庄050015 摘要 目的：为了快速从土壤中定向筛选抗生素产生菌，本研究利用宏基因组技术进行了土壤中抗生素产 生菌的快速筛选方法的摸索和研究。方法：建立了用液氮冷冻法和PVPP柱层析法的提取纯化方法，利用6种 不同土质的土壤进行了方法验证，并利用Herbimycin产生菌掺人土壤进行了抗生素产生菌筛选方法学的验证。 结果：经提取和纯化后，每克湿土可得到32．25—61．25斗g 后，利用基于合成基因簇设计的特定引物可以从中扩增出目标条带。同时被掺入土壤菌体可以重新被分离纯化 出来。结论：本研究建立了一种快速的定向抗生素产生菌筛选方法，该方法快速、灵敏，比传统的筛选方法减 少了大量繁重的工作量，为微生物新药的开发建立一种全新研究方法。 关键词 土壤宏基因组、DNA提取、DNA纯化、基因筛选 TheMethOdof forActiVeSubstance Screening StrainsfrOm SOiI PrOdLjcing SO¨by MetagenOmics Li He Ruolan，ZhengZhihui，ZhangHua，LuXinhua，Jiangong NationalMicmbialMedicine New Researchand Center， DevelopmentCo．， En百neeringResearchDrug Ltd．ofNor山ChinaPhannaceutical Co叩omtion，ShijiazIlu肌g050015，China Abstract screenforactivesubst锄ce strainsf而msoil soil Objective：To IIlicroorgonismp加ducing by metagenom— altemativemetllodwllich methodswas method诵th new di如rent硒mtraditional Method：freeze ics，a deVel叩ed． liquid f如m of PVPP weredeVel- of DNA sixdi您erentkindssoil粕d column metllod nitmgen directly extracting chromatogmphy of methodwasevaluatedinoculatedsoil． and micro— screening Result：After purifying oped．Thesensitivity by extracting were bial IIlicrobialDNAfrom soilcouldbeex