FuGNE6与pGPu6GFPneo-GPC3-iRNA质粒不同比率对HepG2细胞转染效率的影响.pdfVIP

山西医科大学学报，2015年 箜 ·25 · FuGNE6与pGPu6／GFP／neo．GPC3一iRNA质粒不同比率对 HepG2细胞转染效 率的影响 姜菲菲 ，赵焕英 ，隋雷鸣 ，绳 波 ，徐 萌 ，李 莉 l首都医科大 北京佑安医院临床检验中心，北京 100069；首都医科大学医学实验与测试中心；共同第一作者； 通讯作者，E-mail：zhaohy75@sina．com) 摘要： 目的 探讨转染试剂FuGNE6与pGPu6／GFP／neo-GPC3-iRNA质粒不同比率对HepG2细胞转染效率的影响，并寻找最 佳的转染比例。 方法 采用转染试剂FuGNE6(以6 为例)与GPC3一iRNA质粒 (}Lg)比率分别为6：0．5，6：1，6：1．5，6：2， 6：4，6：6及 GPC3．iRNA量固定 1 g(以此为例)，转染试剂与GPC3一iRNA质粒 (g)比率分别为2：1，4：1，6：1，8：1，10：1进行 转染。分别用荧光显微镜 、流式细胞仪及 PI染色实验观察细胞转染效率及48h细胞存活率。 结果 FuGNE6固定为6 l 时，质粒用量从0．5—2 g转化效率逐步增高，超过2 g后转染效率反而大大降低，各比例组在48h细胞存活率都在 95％以 上；质粒量固定为 1 g时，随转染试剂增加转化效率不断增大，超过6：1时，随转染试剂增加，48h细胞存活率也逐渐下降。 结论 FuGNE6与 GPC3一iRNA比例为6：1．5时转化效率最大，且细胞存活率高。 关键词 ： 转染； FuGENE6； HepG2细胞 中图分类号： Q81 文献标志码 ： A 文章编号： 1007—6611(2015)01一o025—03 DOI：10．13753／j．issn．1007—6611．2015．01．007 EffectofdifferentratiosofFuGNE6topGPu6／GFP／neo-GPC3-iRNA ontransfecti~n·effi ciencyinHepG2cells JIANGFei~i，ZHAOHuanying ，SUILeiming，SHENGBo，xuMeng。，LILi (CenterofClinicalLaboratories，BeringYouan Hospital，CapitalMedicalUniversity，BeijingJDo069，China；CoreFacilitiesCenter，CapitalMedicalUniversity；Co-firstauthor； Correspondingauthor．E—mail：zhaohy @sina．com) Abstract： Objective ToexploretheeffectsofdifferentratiosofFuGNE6topGPu6／GFP／neo—GPC3一iRNA(transfectionvectors)on transfectionefficiencyinHepG cells．andtofindouttheoptimizedratio． Methods GF’C3一iRNAwastransfectedwithFuGNE6and thetransfectionefficiencywascomparedatdifierentratiosofGPC3．iRNAtotransfectionreagent(FuGNE6)．rhedifferentamountsof GPC3一iRNA wasaddedto6LLlofFuGNE6atdifferentFuGNE6-to．GPC3一iRNAratiosof6：0．5，6：1，6：1．5，6：2，6：4，6：6，respec— tively．Additionally，FuGNE6wasaddedto1 gofDNAatdifferentFuGNE6一to-GPC3一iRNA ratiosof2：l，4：1，6：1，8：1，10：1。re． spectively．Fluorescencemicroscope．flow cytometerandPIstainingwereusedtodetectthetransfectionefficiencyandthecellsurvival rateat48haftertransfection． Results WhentheamountofFuGNE6was6 l，thetransfectionefficiencygraduallyincrea