RNAi技术介导舞毒蛾热激蛋白Hsp40基因功能分析.pdfVIP

安徽农业科学。JournalofAnhuiAgri．Sci．2014。42(26)：8890—8893 责任编辑 李占东 责任校对 况玲玲 RNAi技术介导舞毒蛾热激蛋 白Hsp40基因功能分析 王志英，问荣荣 (东北林业大学林学院，黑龙江哈尔滨150040) 摘要 [目的]测定Hsp40基因沉默对舞毒蛾生长发育及Hsp40基因表达量的影响。[方法]体外合成双链 RNA(dsRNA)，并将dsRNA 通过微注射入舞毒蛾3龄幼虫体内，测定Hsr~lO基因沉默对舞毒蛾生长发育及HsrCtO基因表达量的影响。[结果]分别注射 ddHO、 dsRNAGFP和dsRNAHsraO后8d，dsRNAGFP处理组舞毒蛾幼虫相对取食量显著高于ddH2O和dsRNAHsp40处理组(PO．05)；但3种 处理对舞毒蛾幼虫的相对生长率、食物利用率、食物转化率、近似消化率方面均无显著性差异。注射后4d，ddH：O处理组的舞毒蛾幼虫 体重累计增长率最大，其次是 dsRNAHsp40处理组，dsRNAGFP处理组的体重累计增长率最小，这与4d的幼虫鲜重一致；其余 时间点， dsRNAHsp40处理组的体重累计增长率均大于ddHO和dsRNAGFP处理组。将 1 (1 )的dsRNA注射入舞毒蛾幼虫体 内，6～48 hHsrS~O基因表达量显著下降，96h基因表达量上调。[结论]该研究为进一步利用沉默舞毒蛾Hsp40基因在害虫防治中的应用提供理 论依据。 关键词 舞毒蛾；nsrst0；RNA干扰；基因沉默 中图分类号 S188 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2014)26—08890一o4 FunctionalAnalysisofm S,tOGenein ~ymantriadisparM ediatedRNAiTechnology WANGZhi-yingetal (CollegeofForestry，NortheastForestryUniversity，Harbin，Heilong~iang150040) Abstract 0『 eetive11heaimwastomeasuretheeffectsofHsrS~0genesilencingongrowthandHsr,~OgeneexpressionofLdisparlarvae． [Method]Thel ofdouble．s~andedRNA (dsRNA)invitrosynthesized，wasmicroinjectedinto3rdinstraLymantriadispar1arvae．The effectsofnsp40genesilencingongrowthandnsp40geneexpressionofL disparlarvaeweremeasured．fResult】Theresultsshowedtherelative consumptionrate(RCR)ofL d )arlarvaemicroinjectedbydsRNAGFPwashigherthanthosemicroinjeetedbyddH2OanddsRNAHslMOat8 dtimepoint．However，relativegrowthratio(RGR)，efficiencyofconversionofingestedfood(ECI)，approximatedigestibility(AD)，efficien- cyofconversionofdigestedofod(ECD)0fL disparlarvaeamongthreetreatmentswerenosignificnatdifferences．After4dofmicroinjection， hteweightcumulativegrowthratesofL disparlarvaeweredecreasingorderofddH，O．dsRNAHsp40naddsRNAGI ，whichwereconsistent withthelarvaeweight．Attherestof timepoints，weightcumulativegrowthrateof dsRNAHsp40treatmentgroupweregreaterhtanothertreat— mentgroups．Aftermicroinjection1 ofdsRNAintothe厶 disparlarvaerangedfrom6