应用SSA报告载体提高ZFN和CRISPRCas9对猪IGF2基因的打靶效率.pdfVIP

遗 Hereditas(Beijing)2015年1,EJ，37(1)：55—62 WWW．chinagene．on 研究报告 应用SSA报告载体提高ZFN和CRISPR／Cas9对猪 IGF2基因的打靶效率 吴金青 ，梅瑰 2，刘志国 ，陈瑶生 ，丛佩清 ，何祖勇 1．中山大学生命科学学院，有害生物控制与资源利用国家重点实验室，广州 510006； 2．广东省农业科学院动物科学研究所，畜禽育种国家重点实验室，广州 510640 摘要：IGF2(Insulin．1ikegrowthfactor2)基因作为最复杂多样的生长因子之一，对猪胎儿发育以及出生后生长发 育和肌肉生成起着非常重要的作用。通过基因组编辑技术对我国本地猪种的佑 基因作精确的遗传修饰，对 于提高本地猪种的瘦肉率具有重要的育种意义。文章在蓝塘猪胎儿成纤维细胞(Porcinefetalfibroblasts，PEF)中 检测了锌指核酸酶(Zincfingernucleases，ZFN)和CRISPR／Cas9对IGF2基因的打靶效率，结果表明CRISPR／Cas9 对IGF2基因的切割效率最高可达 9．2％，显著高于ZFN 的切割效率(1％)，但两者均未达到作为体细胞核移植 (Somaticnucleartransfer，SCNT)供体细胞所需的打靶效率。应用 SSA(Single—strandannealing)报告载体筛选技术 来富集IGF2基 因被 ZFN和CRISPR／Cas9修饰过的PEF细胞，结果表明，该技术可使CRISPR／Cas9的打靶效 率提高 5倍左右，对ZFN的打靶效率具有更大的增强作用。 关键词：IGF2基因；ZFN；CRISPR／Cas9；SSA报告系统 一Improvin‘ggenettaarrggeettiinngg：ell一icciieenncc~yOonnpi。gl一(一iP—2meeOdiiaatteedb’yZFNSs andCRISPR／Cas9byusingSSAreportersystem JinqingWu ，GuiMei，ZhiguoLiu ，YaoshengChen ，PeiqingCong ，ZuyongHe 1．StateKeyLaboratoryofBiocontrol,SchoolofLifeSciences，SunYat—senUniversity,Guangzhou51000~China； 2．InstituteofAnimalScience，GuangdongAcademyofAgriculturalSciences；StateKeyLaboratoryoJ’LivestockandPoultry Breeding,Guangzhou510640,China Abstract：IGF2(Insulin-likegrowthfactor21isamajorgrowthfactoraffectingporcinefetalandpostnatalde— velopment．WeproposethattheprecisemodificationofIGF2geneofChineseindigenouspigbreed Lantangpigby genomeeditingtechnologycouldreduceitsbackfatthickness，andincreaseitsleanmeatcontent．Here，wetestedthe genomeeditingactivitiesofzincfingernucleases(ZFNs)andCRISPR／Cas9system onIGF2geneintheLantang porcinefetalfibroblasts(PEF)．TheresultsindicatedthatCRISPP,dCas9presentedcuttingefficiencyupto9．2％． whichwassignificantly higherthanthatgeneratedbyZFNswithDNA cuttingeffi ciencylowerthan l％．However． evenbyusingCRISPR／Cas9，therelativelylowerpercentageofgeneticallymodifiedcellsinthetransfectedpopula一 收稿 日期 ：2014--06--19；修回 日期：2014-08-29 基金项