高效液相色谱法测定发酵液中生物素含量[J].pdfVIP

困 2009，Vo1．26No．8亿学与生物Z程 Chemistry Bioengineering 高效液相色谱法测定发酵液中生物素含量 黄 琴 。丁安子 。宋 娟 (湖北工业大学发酵工程省部共建教育部重点实验 室，湖北 武汉 430068) 摘 要：采用高效液相色谱法测定发酵液 中生物素的含量 。结果表 明，样 品浓度在 5～150 g·mL-1范围内线性关 系良好 ，最低检测限为 0．01 g ·mL_。，精密度实验的 RSD为0．21 ，稳定性实验的 RSD为6．6 ，发酵液在 15h内检 测结果无明显差别，加样回收率在 95 ～102 之 间。该方法简便 、快捷 、准确 、重现性好 ，可用于发酵液 中生物素的含 量测定。 关键词：生物素 ；发酵液；高效液相色谱 ；含量测定 中图分类号 iO657．7 Q563 文献标识码 ：A 文章编号 ：1672～5425(2009)08--0088一O3 生物素 (Biotin)又称维生素 H，是一种水溶性维 光光度计)、色谱柱 SymmetryCl8柱 (4．6mm ×150 生素，参与机体三大营养物质的代谢 ，是动物机体维持 miD,，5 m)、UV一2450型紫外分光光度计 ，日本 岛津 ； 正常生理机能所不可缺少的低分子有机物 。作为机体 CQ250型超声波清洗器，上海超声波仪器厂；EBA21 中羧化 、脱羧和脱氢反应酶系的辅助因子 ，生物素在碳 型离心机 ，德国HETTICH公司。 水化合物、脂类 、蛋 白质和核酸的代谢过程 中发挥着重 1．2 色谱条件 要作用 ，除用于治疗人体因缺乏生物素所引起的贫血 、 流动相采用 甲醇一 pH值 2．5磷酸缓冲溶液 (14 脱发 、情绪抑郁等症状外 ，还可用于治疗畜禽因缺乏生 ：86)，使用前经超声波脱气后用 0．45|lm 的滤膜抽 物素引起的生长迟缓 、皮炎、脱毛等症状[1]。随着生物 滤 。色谱条件为：流速 1．0mL ·min～，进样量 2O 工程技术的发展 ，人们开始采用发酵法生产生物素 ，发 肚L，柱温 35℃，检测波长 210rim。 酵法生产生物素具有工艺简单、原料来源广泛 、成本 1．3 标准品溶液 的配制 低 、安全性高等特点 ]。 精密称取适量生物素标准品，加无水 乙醇定容至 生物素的测定方法有酶免疫法[3]、分光光度法[4]、 5OmL，超声波脱气后用滤膜过滤，即得 150 g · 荧光光度法嘲、微分脉冲极谱法 引、微生物测定法Ⅲ mL 标准品贮备液。 等 ，均操作繁琐 、准确度不高。由于发酵液成分复杂 ， 1．4 供试品溶液的配制 采用一般 的溶剂提取法无法去除干扰组分；而采用高 取发酵液 25mL，水浴浓缩至 10mL后加入 25 效液相色谱法，样品经过简单 的处理就可 以进行定量 ． mL乙醇，振荡 ，离心后取上清液水浴浓缩至 10mL； 分析。 再加入 25mL乙醇 ，振荡，离心后取上清液水浴浓缩 作者在此采用高效液相色谱法检测发酵液 中的生 至 10mL；继续加乙醇 25mL，振荡 ，离心后取上清液 物素含量，该方法至今未见国内有文献报道，为发酵法 水浴蒸干 ，用流动相溶解定容至 25mL，离心，过滤，即 生产生物素提供了一种可靠 、准确的跟踪检测手段 。 得供试品溶液 。 1．5 线性实验 1 实验