RNA干扰治疗马凡综合征的载体与靶位点基础研究.pdfVIP

ScienceResearch ·135· 生命科学研究Life RNA干扰治疗马凡综合征的载体和靶位点基础研究① 赵元，胡冬煦，王冰，文路，夏家辉 (中南大学湘雅二医院，长沙410011) [摘 要]目的：以中国人马凡综合征C1037del型突变为基础，设计并构建针对此突变FBNl基 因mRNA的特异性RNA干扰质粒栽体，研究此戢体通过在人体细胞中有效介导RNA干扰，发 挥对目的基因高效且特异的抑制作用。同时，初步探讨C1037del位点作为RNA干扰治疗马凡综 合征有效靶位点的可行性。方法：采用携带H1启动子的pBSHHl质粒，设计并构建可有效表达 作用，构建包含C1037del位点序列和包含正常FBNl基因相应序列的融合蛋白表达质粒。在阳离 子脂质体介导下，通过共转染人HTl080细胞株，流式细胞仪分析、检测荧光表达的变化，来研 实验设计要求。细胞水平共转染实验结果表明，EGFP融合蛋白质粒均可表达出绿色荧先。构建 的RNA干扰戢体pGi对融合蛋白质粒的荧光表达可产生高效的RNA干扰抑制作用，最大效率超 结论：RNA干扰可高效且特异地抑制目的基因的表达。pBSHHl质粒是一种可在人体细胞中有 效表达的RNA干扰栽体。通过研究C1037del靶住点，结果表明RNA干扰存在位王效应。 [关键词]马凡综合征；RNA干扰；pBSHHl质粒；位王效应 Basic ofvectorand siteon of study target therapy Marfan RNAinterference syndromeby ZHAO Yuan，HUDong-xu，WANGBing，WENLu，XIAJia—hui ofThoracicandCardiovascular (Department Surgery。 South 41001 The2nd 1，China) XiangyaHospital，CentralUniversity，Changsha orderto themutantFBNl mRNA-basedforMarfan Abstract：Objective：Instudy gene therapy RNA the onthe ofRNAi interference，we efficiency pBSHHl syndromeby emphasizeexperiment vector siRNAto intomammaliancell，andby throughdelivering effectivelysuppressspecificgene RNAimakesurewhetherC1037deliSaneffectiveRNAi the ofthe effectof to target study positional areconstructedstandard withsucc