基于树枝状高分子化合物和功能化纳米金的电化学免疫传感器的构建和其对α-突触核蛋白的检测.pdfVIP

基于树枝状高分子化合物及功能化纳米金的电化学免疫传感器 的构建及其对α-突触核蛋白的检测 * 安雅睿, 江小丽, 陈华, 毕文姬, 黄齐林, 陆丹琴, 张文 , 金利通 （华东师范大学化学系上海市 200062 ） *通讯联系人: 021 E-mail: wzhang@chem.ecnu.edu.cn 免疫传感器具有分析灵敏度高、特异性强、使用成本低等特点，将纳米材料 引入免疫传感器，使得纳米组装免疫传感器成为新的研究热点。目前，电化学免 疫传感器具有可实现在体检测，不受样品颜色、浊度的影响，并且需要的仪器相 对简单等优点，已被广泛地应用于重要生物组分的检测[1] 。α-突触核蛋白 (α-Synuclein，α-SYN)是一个由140个氨基酸残基构成的蛋白质。研究证明该蛋 白与帕金森氏病(PD) 的发病密切相关。对该蛋白结构、功能和聚集的研究可能 为我们对 PD 的认识提供新的见解。此外，定量检测细胞外α-SYN 的含量能够为 共核蛋白病(例如 PD)提供一种临床诊断依据[2-3]。因此，建立一种快速、灵敏的 α-SYN 检测方法，对 PD 的病理学研究和临床诊断具有重要意义。 本文制备了一种新型电化学免疫传感器,并用于α-SYN 的定量检测。树枝状 高分子化合物 PAMAM [4]与 Au 的纳米簇合物，由于PAMAM 表面丰富的氨基及 Au 纳米粒子的存在，不仅为蛋白质的固定提供了良好的载体，而且能够提高电 子转移速率。同时制备了金纳米粒子与酶标二抗的生物探针，通过增加金纳米粒 子上酶的负载量，来起到信号放大的作用。通过抗原与抗体的特异性识别反应， 将上述纳米簇合物与功能探针应用于电化学免疫传感器。实验结果表明，电流信 号与α-SYN 的浓度具有良好的线性关系，且检出限低，线性范围宽。该传感器 灵敏度高，稳定性好，有望成功应用于生物蛋白质的临床检测。 结果与讨论 1. PAMAM-Au 纳米簇合物的表征 Figure 1. UV-vis spectra of (a) KAuCl4 solution, (b) PAMAM solution, and (c) PAMAM-Au nanocomposites in their aqueous solution. Inset: TEM images of Au nanoparticles with resolution of 5 nm. 由图 1 可以看出当 PAMAM 与 Au 复合后，簇合物( 曲线c)在 520nm 处形成 了一个新的特征吸收峰，PAMAM 的吸收峰强度降低，说明已经成功制得 PAMAM-Au 纳米簇合物。图 1 的插图为 PAMAM-Au 的高分辨电镜图，可以看 出，Au 纳米簇形状近似球形，粒径约为 5nm 。 2. 电化学免疫传感器检测α-突触核蛋白 Figure 2. Linearity obtained with the immunosensor analyzing with different concentrations of α-SYN under o