结缕草(Zoysia+japonica)抗寒相关转录因子ZjDREB1基因的克隆、表达模式和功能分析.pdfVIP

构建了植物过表达载体并对喜树进行遗传转化，获得了转基因细胞株。喜树碱检测结果显示tdc过 表达能促进喜树碱和10一羟基喜树碱含量的积累。3．喜树碱和10一羟基喜树碱提取方法的优化及 0．羟基喜树碱的最优方法为： RP—HPLC荧光检测方法的建立。通过比较，获得同时提取喜树碱和1 羟基喜树含最的方法。 表达模式及功能分析 王舟，张芳，刘建秀· (江苏省中国科学院植物研究所，南京210014)， 耐践踏、养护投入低等优良坪用特性，是绿化、足球场草坪和高尔夫球场草坪的主要建群种。假俭 草(Eremochloa ophiuroides)是禾本科蜈蚣草属多年生宿根性优良草坪植物。它具有叶形优美、植 株低矮、养护水平低、耐贫瘠、病虫害少等优点，广泛应用于庭院草坪、休憩草坪以及水十保持的 草坪建设中。然而，由于假俭草抗寒性相对较若且枯黄期长，限制了其在距热带北部及温带地区的 厂一泛应用。因此，提高优良假俭草品种的抗寒性对于扩大其应用范围具有重要意义。 由于我国结缕草相关研究一I：作起步较晚，其功能基因的发掘和分子育种有待进一步深入研究。 为了揭示草坪草抗逆分子机制，获得具有自主知识产权的优良抗逆基因，本研究在筛选抗寒性强的 结缕草品种的基础上，克隆其抗寒相关转录因子zjDREBl基因，并对其表达模式和功能进行了分 析。以假俭草优良品系‘E-126’为材料，以克隆zjDREBI基因为目的基因，采用农杆菌介导法进 行遗传转化研究，建立并优化了遗传转化体系；采用PCR和荧光定鼍PCR技术对抗性植株进行分 子检测，并对转基闪后代进行抗寒性的生理鉴定。 主要研究内容和结果如F： 1．以美国引进的并在国内外草坪生产上普遍应用的结缕草三个优良品种——Meyer(Zoysia 3)为 japonicaCV．Meyer)、Palisades(Z．japonicacv．Palisades)和兰引3号(ZjaponicaCV．Lanyin 试验材料，通过叶片电解质外渗法，利用、}致夕匕温度(L1k)为评价指标，鉴定各品种的抗寒性。 的方法从冷诱导的抗寒结缕草品种中扩增到了一个新的DREB同源基因，命名为ZjDREBl (GenBank登录号：GQ848096)。该基因的开放阅读框(ORF)为774bp。编码257个氨基酸，分 子量和等电点(pI)分别为28．85 根据高等植物肌动蛋白相似性构建的系统进化树显示，结缕草zjDREBI与狗牙根BeDREB!、 1)，分析发现其由2个外显子和1个内含子组成。 的基因组DNA序列(GenBank登录号为GQ86401 这是首个从结缕草中分离得剑的DREB类转录因子基因。 3．为在研究zjDREBI基因的表达模式时提供分子内参，采用RACE技术扩增出i560bp的结 缕草肌动蛋白基因全长eDNA序列。序列分析表明，该基因的开放阅读框(ORF)为1134 bp，编 kDa 码377个氨基酸，5’1#编码区117bp，3’非编码区309bp，分子量和等电点(pI)分别为41．72 和5．23。所得序列与GenBank中收录的其它植物肌动蛋白核苷酸序列的一致性均在85％以上，氨 物肌动蛋白相似性构建的系统进化树显示，结缕草肌动蛋白ZjACT与大麦Hvactin和圆锥小麦 TtACT-I肌动蛋白之间的亲缘关系最为密切，在进化中分化时间最为接近。进一步分离克隆了结缕 内含子组成。本研究有助于揭示植物Aetin基因家族的进化历史，为研究植物Aetin基因家族功能 和进化上的多样性奠定理论基础，同时也为开展草坪草和牧草Actin基因的功能分析和利用研究提 供参考。 4．以克隆得到的结缕草肌动蛋白基因ZjACT为内参，利用实时定量PCR方法分析了三个结缕 处理lh后，该基因开始被诱导，并在持续的冷胁迫下表达量快速增加，处理