流式细胞仪检测小鼠Th1%2fTh2型细胞因子表达.pdfVIP

流式细胞仪检测小鼠Thl丌h2型细胞因子的表达 靳巍1 徐菡1 崔玉芳 柳晓兰 军事医学科学院放射医学研究所免疫学研究室北京100850 根据T细胞分泌的细胞因子谱进行分类，更有利于反应T细胞的功能。Thl细胞主要介导细胞免疫反应， 其中起主要作用的是IFN一丫。Th2主要介导体液免疫反应，其中起主要作用的是IL一4。IFN一谛ⅡIL一4是 调节细胞和体液免疫功能的关键细胞因子，Thl和Th2型细胞单独和二者之间的相互作用，调节着机 体的免疫平衡。因此，研究Thl型和Th2型细胞的功能及变化对于评价机体的免疫功能状态及B细胞 的增殖分化具有重要作用。目前尚未发现可以明显区分Thl型和Th2型细胞的膜表面标志，据此，本 实验选择Thl和Th2型细胞分泌的主要细胞因子IFN一仰IL一4进行研究。 材料和方法：无菌采取正常小鼠外周血(肝素抗凝)和脾脏组织，制备单细胞悬液，加人PMA、 Ionomycin和BFA一起于37。C 加入APC—CD4 Dickinson，USA) 温暗处孵育30min，2ml穿透液洗1次。用流式细胞仪(Becton 进行检测。 讨论：以往通常将T细胞分为辅助性T细胞(Th)和抑制性T细胞(Ts)，且一般认为Th细胞的表面 标志是CD4+，Ts细胞的表面标志是CDS+。近年来，越来越多的实验表明，这种分类法的细胞膜标志和其 功能并不完全符合。因而，应该重新认识所谓的辅助陛T细胞／抑制性T细胞的概念。实际上无论CD4+ T细胞或CDS+T细胞均可发挥正负调节作用，并且在不同条件下，同一亚群T细胞可显示不同的免疫调 节功能和效应。 据此，本实验根据文献资料，选择Thl和Th2型细胞分泌的主要细胞因子IFN一谛ⅡIL一4，尝试进 行小鼠Th细胞亚群的分类研究。经过多次试验的初步结果表明，此方法可用于鉴别小鼠外周血和脾脏 等免疫组织的Thl和Th2细胞亚群。文献中未见此法检测小鼠Thl／Th2亚群的报道，而多见于人外周 胞居多；本实验也发现，在小鼠中也是Thl细胞居多。此外，从本实验还可看出，外周血中因成熟的 Th细胞居多，因而，Thl和Th2细胞亚群的比例也高于脾脏。值得提出的是在整个实验条件中，用于 破膜和刺激细胞增殖的Ionomycin和PMA的浓度和孵育时间至关重要，应予特别注意。 1为并列第一作者 ‘。——262。_——