原生质体融合技术及其在微生物育种中的应用.pdfVIP

安徽农学通报 , Anhu i A griSciBu ll2008, 14 ( 17) 75 原生质体融合技术及其在微生物育种中的应用 张 　静 (南京农业大学生命科学学院 ,江苏南京 　2 10095) 摘 　要 :原生质体融合技术是微生物遗传育种上的一项重要技术 ,它具有遗传信息传递量大 ,不受亲缘关系的影响 , 可有 目的地选择亲株以选育理想的融合株 ,便于操作等优点 ,在菌种选育中具有广阔的应用前景 。本文从原生质体 的制备及其影响因素 、原生质体融合的促融方法 、原生质体融合子的筛选以及融合技术在微生物菌种选育中的应用 等方面进行了综述 。 关键词 :原生质体融合 ;菌种选育 ;生物技术 ;应用 中图分类号 　Q933　　　文献标识码 　A 　　　文章编号 　1007 - 7731 (2008) 17 - 75 - 02 　　原生质体融合育种 ( p rotop la st fu sion) 是 20 世纪 60 2 　原生质体融合技术详解 年代发展起来的基因重组技术 。通过两个遗传性状不同 2 1　原生质体的制备与再生技术 　微生物细胞一般是 的亲株原生质体融合从而达到杂交 目的。1960 年法国的 有细胞壁的,进行该项技术的第一步就是制备原生质体 。 B arsi研究小组在培养两种不同动物细胞混合时发现了自 当前去除细胞壁的方法主要有机械法 、非酶法和酶法 。采 发融合现象 , 同时日本的 Dkada发现仙台病毒可诱发内艾 用前两种方法制备的原生质体效果差 ,活性低 ,仅适用于 氏腹水病细胞彼此融合 , 从而开始了细胞融合的探索 。 某些特定菌株 ,因此 ,并未得到推广 。在实际工作中,最有 1974 年匈牙利的 Fereczy[ 1 ] 采用离心力诱导的方法实现了 效和最常用的是酶法 。该法时间短 ,效果好 。使用的酶主 ( ) 白地霉 C reotrichum cand idum 营养缺陷型突变株原生质体 要为蜗牛酶或溶菌酶 ,具体根据所用微生物的种类而定 。 ( ) 的融合 ;随后人们相继用 N aCl、KCl和 Ca NO3 2 等作为诱 影响原生质体形成的因素很多 ,不同的微生物有其较为适 变剂进行融合 , 但融合率比较低 ; 1978 年国际工业微生物 当的形成条件 。在菌龄选择上 ,多采用对数生长期或生长 遗传学讨论会提出了原生质体的融合问题 , 使这一技术 中后期的菌 ,也有的采用生长后期的,这主要是由于对数 迅速扩展到了育种领域 ; 1979 年匈牙利的 Pe sti首先提出 生长期细菌的壁中肽聚糖含量最低 ,细胞壁对酶的作用最 了运用融合育种技术提高青霉素的产量的报告[ 2 ] , 从而 敏感 ,但是对数生长早期的菌相对较为脆弱 ,受酶的过度 开创了原生质体融合技术在工业微生物育种实际工作中 作用会影响原生质体的再生率 。彭智华[ 3 ] 等对野生大杯 的应用 。 ( ) 蕈 C litocy be m ax im a 进行原生质体制备的过程中, 用 2 从此 , 原生质体融合育种广泛应用于霉菌、酵母菌、 [ 4 ] 种以上的酶液混合使用能提高去壁效果 。陈海昌 等证 放线菌和细菌 , 并从株内、株间发展到种内、种间 ,打破种 明,在一定范围内,酶作用的时间、酶作用的浓度都与原生