肥厚型心肌病患者心肌mtDNA大片段缺失的探讨AnalysisofmtDNADeletiononHeartMusclesofHy.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing)21(1）：16一181999 肥厚型心肌病患者心肌mtDNA大片段缺失的探讨 尹桂芝1)张丽容1、李殿富1)张丽珊2) (1.南京铁道医学院附属医院心内科，2．南京铁道医学院生物教研室 南京 210009) 摘 要 应用LongPCR及PrimerShiftLongPCR技术对3例肥厚型心肌病H（CM）患者和10例正常 引产胎儿的13份心肌标本予以线粒体DNA缺失检测，结果在 1例HCM患者心肌线粒体DNA中发现 约5.Okb缺失，而在正常引产胎儿的标本未见该缺失，提示HCM 的发生可能与mtDNA缺失相关。 关键词 肥厚型心肌病，线粒体DNA，缺失 中图分类号 Q39 AnalysisofmtDNADeletiononHeartMusclesof HypertrophicCardiomyopathyPatients YINGui-ZhiZHANGLi-Rong LIDian-Fu ZHANGLi-Shan (NanjingRailwayMedicalCollege,Nanjing210009) Astract UsniglongPCRandprimershiftlongPCRtechniques,weanalyzedthemitochondrialDNA (mtDNA)isolatedfromtheheartmusclesof3hypertrophiccardiomyopathy(HCM)patientsand10nor- malabortivefetuses.Almost5.OkbdeletionwasfoundintheheartmtDNAofoneHCM patient,whileno deletionwasdetectedinthatof10fetuses.ItisconcludedthatHCMmaycorrelatewithmtDNAdeletion. KeywordsHypertrophiccardiomyopathy,MitochondrialDNA,Deletion 线粒体是细胞氧化磷酸化 O（XPHOS)产生能量的场所，OXPHOS所需的酶是由核DNA与mtDNA共同 编码的，因此mtDNA突变 缺（失、点突变）会直接影响到线粒体功能 1（)。迄今已发现100多种疾病与线粒体 功能障碍有关，在心脏方面主要表现为心肌病变 2（1。1990年Ozawa等首先在原发性心肌病患者心肌mtDNA 中发现缺失，分析它是心肌病的致病因素之一 ’〔〕；1991年我们也在1例HCM患者心肌中发现mtDNA400bp 缺失，认为它与HCM的发生密切相关 4（)。本文应用LongPCR及PrimerShiftLongPCR技术扩增mtDNA 共（16569bp)，在第2695-16445位碱基范围 约（ 14kb）内分析3例HCM患者及 10例正常引产胎儿心肌 mtDNA缺失情况，发现 I例患者存在约5.Okb缺失。 1材 料 和 方 法 1.1研究对象 符合临床诊断标准的肥厚型心肌病患者3例，取其心肌标本，另取 10例正常引产胎儿心肌标本为对照 1.2试剂与方法 1.2.1心肌组织DNA提取 采用常规酚、氯仿、异戊醇抽提法提取心肌组织DNA （内含mtDNA)，将抽提 出的DNA溶于TE缓冲液，置于4℃冰箱保存备用。 1.2.2PCR扩增 试剂购 自美国 PE公司 XLPCRkit（内含 rTthDNA聚合酶，3.3xbuffer,dNTP. Mg(OAc),)，引物由中国科学院上海细胞生物学研究所合成。 1期 尹桂芝等：肥厚型心肌病患者心肌mtDNA大片段缺失的探讨 17 引物起止位置 序 列 扩增片段长度 L,2695一2720 GAG CTCGCGGGCAACACA CAG CAAAC L,一H, H,16459一16436 GGCCTTCCG GAG CGAGACTAG 13.7kb L,5606--562