日本血吸虫Sj CyclophilinA 基因的克隆, 表达及其生物学功能研究.pdfVIP

中国农业科学 2010,43(7):1531-1538 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.07.027 日本血吸虫Sj CyclophilinA基因的克隆、 表达及其生物学功能研究 彭金彪，韩宏晓，洪 炀，王欣之，石耀军，傅志强，刘金明，林矫矫 （中国农业科学院上海兽医研究所/农业部动物寄生虫学重点开放实验室，上海 200241 ） 摘要：【目的】克隆和表达了日本血吸虫 CyclophilinA（ Sj CyPA）编码基因 cDNA，分析其在日本血吸虫不 同发育阶段虫体的表达情况，评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。【方法】从实验室构建的 7 天童虫消减 cDNA 文库中，PCR 扩增一 EST 序列的基因全长 cDNA，提交到 NCBI，登录号为 GQ403666。应用荧光 实时定量PCR 分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况，以pET28a（+）为载体构建重组表达质粒， 并在大肠杆菌中表达。诱导、表达、纯化和复性重组蛋白，测定其 PPIase 活性。利用 Western blot 检测重组蛋 白的抗原性。以重组抗原免疫小鼠，评估其对小鼠诱导的免疫保护效果。【结果】PCR获得了Sj CyPA编码基因的 全长 cDNA，其开放阅读框为 519 bp。荧光实时定量 PCR 分析表明，该基因在 13 d 童虫表达量最高，为童虫期高 表达基因。构建了重组表达质粒pET28a（+）-Sj CyPA，并在大肠杆菌中成功表达。复性重组蛋白具有PPIase活 性。Western blot试验显示该重组蛋白具有良好的抗原性，在小鼠免疫试验中，与空白对照组比较，免疫组小鼠 获得18.72%的减虫率和44.6%的肝脏减卵率。【结论】获得了日本血吸虫童虫期高表达的 Sj CyPA基因的全长cDNA， 成功构建了 Sj CyPA原核重组表达质粒，在大肠杆菌中成功表达，纯化复性得到有PPIase活性的 Sj CyPA重组蛋 白，并证实该重组抗原在小鼠体内诱导产生了部分免疫保护效果。 关键词：日本血吸虫；Cyclophilin A（CyPA）；克隆和表达；PPIase活性；免疫保护效果 Cloning, Expression and Biological Function Analysis of the Novel Gene Sj Cyclophilin A of Schistosoma Japonicum PENG Jin-biao, HAN Hong-xiao, HONG Yang, WANG Xin-zhi, SHI Yao-jun, FU Zhi-qiang, LIU Jin-ming, LIN Jiao-jiao (Shanghai Veterinary Research Institute Chinese Academy of Agricultural Science, Key Laboratory of Animal Parasitology, Ministry of Agriculture, Shanghai 200241) Abstract: 【Objective 】 The present study was intended to clone a cDNA encoding cyclophilin A in Schistosoma japonicum and subsequently investigate its molecular functions as well as immunoprotective potential as