葱蝇过氧化氢酶基因的克隆及生物信息学分析.pdfVIP

葱蝇过氧化氢酶基因的克隆及生物 I 信息学分析l口，N●广／J。17 胡甘雨 司风玲车燕飞陈斌 1) (重庆师范大学昆虫与分子生物学研究所重庆市动物生物学重点实验室重庆40133 摘要：过氧化氢酶(catalase，CAT)对昆虫的生长发育和代谢活动具有重要意义，是昆虫清 除H202的关键酶。昆虫在滞育期间代谢速率很低，而CAT的活力与代谢强度有关，因此滞育 期的昆虫是研究该酶的良好材料。本研究基于葱蝇转录组unigene序列信息，设计特异性引物 并首次通过PCR技术克隆了葱蝇过氧化氢酶基因全长eDNA，命名为DaCAT,其全长为2073 bp， 开放阅读框1518 kD，等电点为7．72。对其 bp，编码505个氨基酸，推测其相对分子质量为56．8 进行了生物信息学分析并建立了系统发育树，分析表明该基因编码的氨基酸序列具有两个保 守结构域及多个酶活性位点，与其它物种CAT具有较高的同源性，其中和拟果蝇Drosophila 结构预测分析。为进一步研究DaCA瑾因在葱蝇滞育期间的代谢表达、酶活力测定以及具体 功能奠定了基础。 关键词：葱蝇；过氧化氢酶；克隆；生物信息学分析 中图分类号：Q966 前言 过氧化氢(hydrogenperoxide，H202)是好氧生物体内活性氧之一，主要由超氧化物歧化 酶和黄嘌呤氧化酶催化产生，它作为自由基代谢的中间产物，在调控昆虫的耐寒性、抵抗病 原物侵袭以及避免细胞程序化死亡过程中起着重要作用B-31。但逆境下大量产生的H202会引 起细胞损伤和死亡，在保护酶系如超氧化物歧化酶、过氧化物酶和过氧化氢酶(catalase，CAT) 的参与下，生物体内的H202含量可维持在相对稳定的水平【4】，而由于昆虫缺乏Se．谷胱甘肽过 氧化物酶，因此CAT是昆虫清除H202的关键酶，对昆虫的生长发育和代谢活动具有重要意义。 CAT又称触酶，属于末端氧化酶类，广泛存在于植物、动物和微生物体内。CAT基因已 经在人体、小鼠、细菌(Vibriorumoiensis S-1)、酵母8(Aspergillus 基因，为昆虫CAT基因的研究奠定了基础【5】。后来，蜜蜂(Apismellifera)和家蚕的CAT基因 antarctica)的 CAT基因【7】。昆虫的CAT在家蚕方面已经有大量研究，研究表明，CAT是蚕体最主要的保护 酶之一【8】。家蚕会出现卵期滞育的现象，从蚕的生理上看，CAT可以分解H202，从而防止后 者伤害家蚕，维持蚕体正常生理活动【9】。在逆境条件下，CAT活性变化幅度的大小又可作为家 蚕抗逆性强弱的生理生化指标之一【lo】。 滞育(diapause)是昆虫在个体发育的某个特定阶段停止发育的现象，表现出细胞分裂停 止、代谢水平显著下降等特点。葱蝇(Delia an，fgua)是少数同时具有冬滞育与夏滞育的昆虫 之一，它是双翅目、花蝇科、地种蝇属昆虫，是北半球温带地区百合科蔬菜的最重要害虫之 一。葱蝇滞育期间，虫体不食不动、新陈代谢降低、消耗能量少，以这种特有的方式来度过 不良环境，因此研究过氧化氢酶的调节机理，将有助于认知葱蝇蛹滞育期的代谢过程。 本研究通过克隆的方法验证了已知葱蝇转录组中所得到的CAT基因序列全长的正确性， 并命名为DaCAT,在此基础上，通过生物信息学分析，分析了其序列特征、蛋白质一级结构、 method， 信号肽区域、蛋白疏水性＼亲水性特性、氨基酸同源性等，并运用邻接法(neighbor-joining NJ)构建了代表性昆虫CAT系统发育关