HBV BCP区17621764和1896突变位点检测新技术研究.pdfVIP

山面职 Zl薹学院亏攉 2014年 第24卷 第4期 JournalofShanxiMedicalCollegeforContinuingEducation Vo1．24 No．4 2014 HBVBCP区1762／1764和 1896突变位点检测新技术研究 王 泽 ，唐景峰 (1．阳泉市第三人民医院，山西 阳泉 045000；2．武汉大学生命科学学院／病毒学国家重点实验室，湖北 武汉 430072) [摘 要] 目的：利用错配扩增和荧光 PCR原理 ，建立一种针对 HBVBCP区 1762／1764和前 C区 1896突变位 点的新 型检测方法——错配扩增 突变分析 PCR法 (MAMA—PCR)，并对该方法进 行 临床评价 。方 法：a)MAMA— PCR突变检测方法性能评估 ：以野生和 突变性 阳性参考品作 为模板检测 3次 ，分析该方法稳定性 ；将 突变型和野 生型质控 品梯度 比例混合 ，分析该方法检测混合感染的检测效率 。b)测序 法、商品化试剂盒与本 方法 同时检测 样本并对 MAMA—PCR方法做 出评价 。结果 ：MAMA—PCR3次检测重复性 良好 ，CV值均小于5％ ，且可稳定检 出含 1％突变含量 的混合样本 。132例 HBV样本 中，1762／1764双 突变位 点测序法检 出67例 ，ARMS—PCR试剂盒检 出 69例 ，MAMA—PCR检 出69例 ，突变检 出率 分 别 为50．8％、52．3％ff~52．3％ ；1896突变测 序 法检 出 39例 ，ARMS— PCR试剂盒检 出41例 ，MAMA—PCR检 出42例 ，突变检 出率分别为29．5％、31．1％和31．8％ 。结论 ：MAMA—PCR检 测 方法性 能稳 定 ，突变检 出率 高 于测 序 法 ，与 商用试 剂盒基 本 一致 ，可 用 于 临床 乙肝 患者 BCP区 1762／1764双 突 变和 前 C区 1896突变位 点的快速检 测 。 [关键词] HBV；BCP区双 突变 ；前 c区突变 ；MAMA—PCR [中图分类号] R446．7 [文献标识码] A [文章编号] 1671-O126(2014)04-0008-06 TheStudyonM utationLocusDetectionTechnologyoftheHBV BCPDoubleM uta- tionswith 1762／1764 andPrecoreM utationwith 1896 WANGZe ，TANGJingfeng (1．TheThirdPeoplesHospitalofYangquanCity，Yangquan045000，Shanxi，China；2．TheInstituteofLfieScienceof WuhanUniversity，Wuhan430072，Hubei，China) [ABSTRACT]Objective：Toestablishanewmethod(MAMA-PCR)forthedetectionofmutationsat1762／1764and 1896 intheBCPregionandprecoreregionofHBV usingmismatchamplificationandFluorescentPCR andtoevaluate thismethodwithclinicalsamples．Method：a)EvaluatetheparametersoftheMAMA—PCRmutationdetectionmethod： toanalyzethestabilityofreagentsbyreactionswiththreerepeatsusingthewild—typeandmutantreferenceasatemplate； totestthedetectionefficiencyoftheHBV hybridinfection usingmutantandwild-typereferenceswithdifferentmixing ratio．b)ComparetheMAMA-PCRmethodwithsequencingandcommercializedmutationdetectionkitsandevaluatethe MAMA—PCRmethod．Results：ThreetestsofMAMA-PCR hadgoodrepeatabilitywithaCV valueoflessthan5％ and HBV infectionsampleswhichcontained1