5-Aza-CdR对人结肠癌裸鼠移植瘤抑制作用及其机制的研究.pdfVIP

程晓斌 ，等 5AzaCdR对人结肠癌裸鼠移植瘤抑制作用及其机制的研究 《实验研究／论著l 5-Aza．CdR对人结肠癌裸 鼠移植瘤抑制作用 及其机制的研究 程 晓斌 盛勤松 林建江 陈文斌 浙江大学医学院附属第一医院肛肠外科，浙江 杭』i1310003 【摘要】 目的 观察 DNA 甲基化转移酶抑制剂 5一氮杂一2．_脱氧胞苷 (5-Aza—CdR)对人结肠癌裸 鼠移植瘤生长的抑制作 用，探讨其与移植瘤细胞 RUNX3基 因表达和甲基化 的相关性 。方法 皮下接种 SW480细胞建立人结肠癌裸 鼠移植瘤 模型。应用随机数字表法分为 3组，A组为对照组，腹腔注射磷酸盐缓冲液 (2*／g／g)；B组为低剂量实验组，腹腔注射 5一Aza—CdR(1~／g／g)；C组为高剂量实验 组，腹腔 注射 5-Aza—CdR(2Hg／g)。各组每 周给药 3次 ，连续给 药4周，末次给药 后处死裸 鼠。观察各组移植瘤生长情况及病理形态学改变，并采用 TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡情况 ，MSP法检测 RUNX3基 因的 甲基化状态，RealtimeRT—PCR及免疫组化检测 RUNX3的表达水平 ，分析组间统计学差异 。结果 给 药 4周后 ，A组移植 瘤体 积为 (3．63±1．oo)cm。，B组 (3．O2_4-1．43)cm。，C组 (1．8O±0．80)em。，C组与 A、B组 比较 ，差 异有统计学意义，F一7．061，P一0．003。TUNEL法检测结果显示 ，c组移植瘤凋亡指数较高，为(5．66±0．7O) ，与 A 组(1．14±0．45) 、B组(2．83±0．69) 比较 ，差异有统计学意义，F一53．63l，P0．001。基 因甲基化检测发现 ，A组有 较高的RUNX3基 因甲基化水平，而B组及 c组的RUNX3基 因的非 甲基化条带明显扩增 ；而且在 RuNx3基 因表达 上 ，A组 mRNA相对表达量为 14．84±0．53，明显低于 B组的21．66±0．45、C组的46．72_-I-2．64，差异有统计学意义， F一910．128，P0．00l；A 组 RuNX3蛋 白阳性表达率为 (6．84±2．21) ，亦明显低于 B组 (14．54±3．98) 及 C组 (16．25±2．71) ，差异有统计学意义，F一10．745，P一0．004。结论 5Aza—CdR可有效抑制人结肠癌裸 鼠移植瘤的生 长 ，诱导移植瘤细胞凋亡 ，其机制与逆转 RUNX3基 因的过 甲基化状态，诱导移植瘤细胞 RUNX3基 因的重新表达相关。 【关键词】 结肠肿瘤 ；5一氮杂一2一脱氧胞苷 ；RUNX3基 因；DNA 甲基化 ；免疫组织化学 中华肿瘤防治杂志 ，2015，22(5)：344—348 Effect0f5-Aza-CdR onhuman coloniccancerxenografts in nudemiceand itsmechanism CHENGXiao—bin，SHENGQinsong，L N Jian—jiang。CHEN Wen—bin Departmento／’ColorectalSurgery，FirstAffiliatedHospital，SchoolofMedicine，ZhejiangUniversity， Hangzhou 310003，P．R．China [ABSTRACT] OBJECTIVE Toassesstheinhibitoryeffectof5-Aza-CdRongrowthofhumancoloncancerxenografts innudemiceandinvestigateassociationoftheinhibitoryeff