miR-let-7a在大白猪甲状腺中的表达及其对甲状腺细胞凋亡的影响.pdfVIP

瓤 … Onlniesystem婴： rg。．。gy 矗寝赡～‰熊糊…拨蠛一獬堡搬 miR．1et一7a在大 白猪 甲状腺中的表达及其对 甲状腺细胞凋亡的影响 王云霞 王琪 周辉云 郭晓令 王颖 徐宁迎 1浙江大学 动物科学学院，杭州310058：2太原理工大学 力学学院，太原030024 通讯作者，wangying03@tyut．edu．cn；nyxu@Nu．edu．cn 摘 要 microRNA(miRNA)是一类 内源性的非编码RNA，广泛参与细胞的生长发育、分化、增殖和凋亡 等生物学过程 。为了研究miR—let一7a对猪 scrof~)甲状腺的生长发育及甲状腺细胞凋亡的调控作用，本 研究利用免疫荧光技术鉴定了大 白猪的甲状腺组织及体外培养的甲状腺细胞，利用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测 了miR1et一7a在不同生长阶段大 白猪 甲状腺组织中的表达量变化，通过转染miR—let一7a mimics并利用流式细胞术检测了转染组与未转染组的甲状腺细胞凋亡率的差异性，同时预测了miR．1et一7a 与细胞凋亡相关基因的靶向关系。结果发现，甲状腺组织和细胞中的甲状腺球蛋I~t(thyroglobulin，TG)发出 绿色荧光，表明体外培养的甲状腺细胞功能正常。qRT-PCR结果显示，胚胎期随着胚龄的增加，miR．1et一7a 表达量逐渐增加。出生后miR-let一7a表达量下降，于60日龄达生长期最小值，之后有所上升，至90日龄后 其表达量再次下降，120日龄后随 日龄的增加let一7a表达量呈现逐渐增加的趋势。凋亡结果发现，和对照组 相 比，转染组细胞凋亡率明显升高(P0．05)。根据研究结果推测，miR—let一7a的表达直接或间接影响了甲 状腺细胞凋亡的调控过程。研究结果为深入研究猪 甲状腺miR—let．7a的功能机制提供了有益的线索。 关键词 miR—let一7a，甲状腺细胞，细胞凋亡，靶基因 Expression Variation ofmiR—-let-·7a in Thyroid and Its Effect on ApoptosisofThyroidCellofYorkshirePig(Susc咖 ) WANGYun．Xia’WANGQi ZHOUHui—Yun GU0Xiao—Ling Ⅵ NGYing2’ XUNing—Ying lCollegeofAnimalScience，ZhejiangUniversity,Hangzhou310058，China；2CollegeofMechanics，TaiyuanUniversiyt ofTechnology Taiyuan030024，China Correspondingauthors，wangying03@tyut．edu．cn；nyxu@zju．edu．cn Abstract microRNA (miRNA)lSaclassofendogenousandnoncodingRNA，whichlnvolvesinmany physiologicalprocessesincluding cellgrowth，development，differentiation，proliferation andapoptosis．In orderto studytheregulationeffectofmiR—let一7aongrowthanddevelopmentin thyroid，weidentifiedthe thyroidtissueandculuutrecellsinvitroofYorkshirepig(Susscrofa)byimmunofluorescencetechniqueand detectedtheexpressionofmiR-let-7·ainvariousgrowthstagesinthyroidofYorkshirepigbyquantitativeReal-· timePCR(qRT-PCR)．TosutdytheeffectofmiR—let一7aonapoptosisofthyroidcells，miR—let一7atransfected mimicscellswere detected to determine the d