人类疾病的基因诊断策略与技术.pdfVIP

维普资讯 1601 医学杂志 2005年第 2l卷第 l璺 · 综 述 · 人类疾病的基因诊断策略与技术 刘清霞 陈汉春 基 因诊断的问世使人类疾病的诊断 隆 。并最终克隆 目的基 因，然后通过 DNA 的作用是十分微妙的。表型克隆技术 的建 从传统的表型诊断步人基 因型诊断的新 序列分析确定其导致疾病的分子缺陷。这 立、发展和完善 ，使我们看到了对这些复 阶段 ，是诊断学领域的一次革命。相对于 种方法称为功能克隆…。当目的基因序列 杂遗传病进行基因诊断的曙光。 传统的表型诊断，基因诊断具有高特异 未知，但其编码产物的生理生化及代谢途 运用 “反向遗传学”确定和分离致病 性、高灵敏性、早期诊断性和应用广泛性 径研究得比较清楚时，就可以采用这种克 基因成功的例子很多，如 Duchenne肌营养 等特点，因此逐步得到运用和普及。基因 隆方法。迄今分离的基因中，因遗传性代 不 良DI、囊性纤维变…、亨廷顿舞蹈病 、 诊断不仅能对某些临床特定疾病做 出诊 谢缺陷(如酶缺陷)引起的疾病如白化病、 神经纤维瘤 1和成人型多囊肾n等疾病的 断，而且能对肿瘤及其它多因素常见病 苯丙酮尿症 (PKU)和镰状细胞贫血等的 致病基因。都是经此策略确定的。 (如心血管疾病和 内分泌疾病等)进行易 致病基 因。都是根据这一策略分离的。但 2 基因诊断技术 感性预测；可以对传染性及流行性疾病进 实际上我们对很大部分人类遗传病的表 2．1 基因探针杂交 1976年美籍华裔 行诊断和普查 。以及对器官移植组织的 型特征和生化机制及缺陷的了解还太肤 科学家 KAN，Yw采用液相 DNA分子杂 HLA基因水平配型和法医学鉴定等。其中 浅，对这些遗传病 ，这种经典的策略显然 交技术在世界上首次完成 了对 Ot一地 中 在遗传性疾病的诊断研究中的应用最为 不适用 。 海贫血的基因诊断。从此 ，基于分子杂交 突出。目前不但用于产前诊断，也用于症 1．2 反向遗传学策略 原理的基因诊断技术迅速发展 ，先后建立 状前诊断以及携带者检测等。在肿瘤方面 1．2．1 从基因定位人手 遗传连锁图的 了Southern印迹杂交 、Noahem 印迹杂交 、 对部分癌基因与抑癌基 因的发现所起的 建立使对人类基因组 中任何基因的定位 斑点杂交、反向斑点印迹等诊断方法。对 作用也令人鼓舞。本文主要讨论基因诊断 成为可能，这样就可以不必借助于功能信 于突变类型已知的一些遗传病，如地中海 在遗传病和肿瘤诊断及研究中的应用。 息，而仅仅根据遗传图和连锁分析 ，将基 贫血 、苯丙酮尿症等 ，应用 PER扩增的 l 基因诊断策略 因定位到染色体的一个具体位置上。并不 DNA片段直接与相应寡核苷酸探针杂交 经典遗传学 (classicalgenetics)策略 断缩小筛选区域，最终鉴定、分离致病基 (PCR／等位基因特异性寡核苷酸探针杂 是由疾病 的表型改变去追溯有无基 因的 因。这种策略称为定位克隆…。比较正常 交法)，即可明确诊断突变的纯合子和杂合 变异．但在疾病的表型改变并不清楚的情 和异常基因的差别 ，就可找出导致遗传病 子。分子杂交技术灵敏可靠 。重复性好 ，但 况下它就 毫无办法 。 “反 向遗传 学 ” 的分子缺陷 。进而阐明正常和异常基因产 必须使用放射性核素标记的探针 ，费时费 (reversegenetics)或称分子遗传学则在策 物 (蛋白质)的生理功能和病理效应。定位 力。价格 昂贵。难于在临床上推广应用。 略上解决了这个难题。由基因到表型 。采 克隆是当前基因诊断的主要理论基础。 2．2 聚合酶链反应 (polymer