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蛋白质浓度的测定(考马斯亮蓝法).pdf
生物秀-专心做生物！
PART C 酶工程实验
实验十八 蛋白质标准曲线的制作
一、实验目的和内容
目的: 学习考马斯亮蓝（Coomassie Brilliant Blue）法测定蛋白质浓度的原理和方法
内容：制作测定蛋白质浓度的标准曲线。
制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。一般用分光光度法测物质的含量，先要
m
制作标准曲线，然后根据标准曲线查出所测物质的含量。考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，是
o
利用蛋白质―染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。考马斯亮蓝
c
G－250 存在着两种不同的颜色形式，红色和蓝色。它和蛋白质通过范德华力结合，在一定
e.
蛋白质浓度范围内，蛋白质和染料结合符合比尔定律（Beer’s law）。此染料与蛋白质结合
后颜色有红色形式和蓝色形式，最大光吸收由 465nm 变成 595nm，通过测定 595nm 吸光度可
o
测定蛋白质的含量。另外，反应体系中呈现的颜色变化主要是 G-250 分子间疏水相互作用形
i
成的聚集体聚集程度不同引起的。单体形式表现为蓝色，单体和聚集体共存时表现为绿色，
全为聚集体形式呈现为棕红色。影响因素主要为溶液体系中磷酸、乙醇、NaCl 的含量。
b
e
物 .
w
生
Coomassie Dye-Based 蛋白质定量
w
易w O C H2 CH3
Coomassie G-250
NH
PROTEIN +
C H3 C H3
C
+
CH 3C H2 N N CH2 CH 3
C H2 C H2
- Acid
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