食品中拟态弧菌变性高效液相色谱检测技术研究.pdfVIP

※分析检测 食品科学 2009, Vol. 30, No. 06 175 食品中拟态弧菌变性高效液相色谱 检测技术研究 1,2 1 1 1 1 2 郑秋月 ，曹际娟 ，蒋 丹 ，刘淑艳 ，赵 昕 ，傅俊范 (1.辽宁出入境检验检疫局，辽宁 大连 ；2.116001沈阳农业大学，辽宁 沈阳 110161) 摘 要：应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术对食品中致病菌——拟态弧菌进行检测，探讨其灵敏度特异 性，建立快速高通量检测食品中拟态弧菌的新方法。利用DHPLC在非变性温度下进行双链DNA分离的原理，应 用DHPLC技术分析拟态弧菌特异性PCR扩增产物。在优化的分析条件下，对样品洗脱峰排列形成的聚类分析图 进行分析，得到拟态弧菌的特征峰型图谱。结果表明该方法有很好的特异性。与传统检测方法进行比较该方法准 确度为100%。本实验建立的食品中拟态弧菌PCR-DHPLC检测技术，特异性灵敏，准确度高，操作快速、简 便，在食品安全检测中具有重要应用价值。 关键词：拟态弧菌；聚合酶链式反应；变性高效液相色谱法 Study on Determination ofVibrio mimicus 1,2 1 1 1 1 2 ZHENG Qiu-yue，CAO Ji-juan，JIANG Dan，LIU Shu-yan，ZHAO Xin，FU Jun-fan a； Abstract： pathogenic bacteria,Vibrio mimicus Vibrio mimicus Key words：Vibrio mimicus；PCR；DHPLC 中图分类号：TS201.6 文献标识码：A 文章编号： ——拟态弧菌进行快速检测的方法。样品仅需快速增菌 变性高效液相色谱法(denaturing high performance liq- uid chromatography，DHPLC)是在高效液相色谱法的基 培养几小时，即可直接取样品增菌液检测拟态弧菌。与 础上发展起来的、在分子DNA水平上进行微生物检测 传统检测方法进行比较，结果表明PCR-DHPLC方法准 [1] 确度为100%，说明该PCR-DHPLC方法具有广泛而良好 的一种新方法 。DHPLC技术可以稳定、准确地从种 属和菌株水平识别微生物，弥补传统表型识别方法的缺 的适用性。 [2] 陷 。是检测混合微生物样本的全自动化操作分析平 1 材料与方法 台，不仅能鉴定常见的微生物，还能鉴定不常见的、 苛刻的、厌氧的细菌。DHPLC根据特定样本中各种微 1.1菌株、试剂与引物 生物的峰形对目标菌进行鉴定，样本的峰形谱可用于定 拟态弧菌(Vibrio mimicus，BJ050；ATCC33653、 性和定量监测样本中各种微生物的动态变化。本实验拟 33654、33655、700326)及分离株，霍乱弧菌(Vibrio [71] 建立PCR-DHPLC技术在非变性条件下对食品中致病菌 cholerae，VC33)、副溶血弧菌(Vibrio 收稿日期：2008-04-17 基金项目：“十一五”国家科技支撑计划项目(2006BAK02A13) 作者简介：郑秋月(1972-)，女，工程师，硕士，研究方向为食品微生物检验。E-mail：zh