赤子爱胜蚓(Eisenia_foetida)中抗肿瘤与纤溶酶原激酶活性蛋白质的分离与鉴定.pdfVIP

维普资讯 生 物 化 学 与 生 物 物 理 学 报 ACTAB10CHIMICAetB10PHYsI(ASINICA2002，34(5)：576—582 CN31—1300／Q 赤子爱胜蚓 (Eiseniafoetida)中抗肿瘤与纤溶酶原 激酶活性蛋 白质的分离与鉴定 赵 锐 纪建国 童元鹏 陈 倩 蒲 海 茹炳根 (北京大学生命科学学院蛋白质组学研究室，北京 100871) 摘要 采用SephadexG-75和HiPrep16／60DEAE离子交换等方法从赤子爱胜蚓(Eiseniafoet~la)中提取到一组 活性蛋白质成分，双向电泳分析证 明它们为一组 pI在 3．0～4．0之 间的酸性蛋 白质；利用体外 K562、HeLa、 SY5Y等肿瘤细胞抑制实验和纤维蛋白平板实验，跟踪测定活性，证明乙醇沉淀组分 D2(8)是既具肿瘤抑制，又 具有激酶活性的蛋白质成分。同时应用非变性电泳对乙醇沉淀组分进行分离，并利用电洗脱、凝胶原位酶解和 ESI—MS等蛋白质组学方法，鉴定了其中6种蛋白质的分子量、氨基酸组成、N末端序列和肽质量指纹图信息，其 中条带9与D2(8)组分为同一种蛋白质；研究证明蚯蚓中含有既具抗肿瘤活性又具有激酶活性的蛋白质成分。采 用的方法可适用于活性蛋白质成分的整体分离与鉴定。 关键词 蚯蚓；抗肿瘤；激酶；蛋白质 蚯蚓，寡毛纲动物，又名地龙，为我国传统的 应用 ，6J。因此利用蛋白质组学和蛋白质化学的方 治疗心血管疾病的药物，早在 《神农本草经》中就有 法对蚯蚓整体的蛋白质活性成分研究具有广阔的应 记载。自从 日本宫崎医科大学的美原恒等…1从粉正 用开发前景。我们以新鲜的蚯蚓为原料，采用乙醇 蚓(Lumbricusrubellus)中分离到 6种具有纤溶活 沉淀方法，经分子筛和离子交换分离、非变性电泳 性的组分以来，蚯蚓中纤溶活性成分的研究受到了 和蛋白质组学方法鉴定，结合活性跟踪实验，初步 人们的重视。同时在蚯蚓中还提取到抗肿瘤活性成 研究了蚯蚓乙醇沉淀方法提取的蛋白质成分和它们 分胍类物质蚯蚓素 (D．1umbricine)，实验证实其具 的溶栓及抗肿瘤活性，为偏酸性和具有生物活性的 有抑制小鼠自发性乳瘤发生的作用；蚯蚓特殊的生 蛋 白质研究提供了方法学基础。 活环境，促使其 自身合成一些特殊的蛋白质成分， 适应恶劣的环境，因此对蚯蚓中新的活性物质研究 1 材料和方法(MaterialsandMethods) 具有重要的意义。 1．1 仪器和设备 蛋白质组学 自从 1994年由MarcWilkins等 2 HimacCR21冷冻超速离心机 (日本，Hitachi 提出以来，获得了快速的发展及广泛应用，蛋白质 公司)；循环冷凝仪 (德国，Colora公司)；恒温振荡 组学的核心技术是高分辨率、重复性好的双向电泳 器(美国，NewBrunswickScientific公司)；半干式 技术和以生物质谱为基础的蛋 白质结构鉴定技术。 电转膜仪、蛋白质测序级PⅥ)F膜 (0．2肿 )、电洗 双向电泳可将复杂的混合物中的数干种蛋白质成分 脱仪(美国，Bio—Rad公司)；LKB层析系统(瑞典， 展示在一张凝胶电泳图谱中，多种质谱解析技术可 Pharmacia公司)；ABI491型蛋白质测序仪 (美国， 对凝胶分离的蛋 白质进行快速、准确的结构鉴 AppliedBiosystem)。 定 3【,4J，因此蛋白质组学的研究方法极大地推动生 IPGphor电泳单元、灌胶模具、SE．600垂直电 物学相关领域的发展，在临床医学、毒理学、新药 泳单元、双 向电泳仪、EPS一301电源、AKTA 研究、微生物学、农业科学等不同领域获得广泛的