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油松球花发育与性别调控分子机制研究 钮世辉1李哲馨1方攀2陈晓阳1’扣李伟1+ (1北京林业大学生物科学与技术学院北京1000832华南农业大学林学院广州510642) 摘要：两性球花突变体广泛地存在于几乎所有的针叶树物种中，是球花发育与性别调控机制 研究珍贵的遗传材料，但其分子生物学基础研究因遗传信息匮乏而一直没有开展。本研究以 584 油松多个体多组织样本均一化cDNA文库为材料，通过第二代高通量测序，获得了46 个油松单基因簇；基于这些序列信息，设计并定制了油松表达谱芯片；通过对两性球花不同 性别结构、两性球花紧邻雄球花及正常雌雄球花高通量基因表达谱芯片分析，发现两性球花 雄性结构基因表达谱与正常雄球花相比发生了明显趋于雌球花基因表达谱的转变，而特异调 控雄球花发育的B类MADS—box转录因子及其转录激活蛋白UFO在两性球花雄性结构中的 表达量低于正常雄球花，推测这些基因在早期发育阶段的雄球花顶部的表达抑制使雄球花特 异遗传调控程序无法激活继而导致雌性结构的异常发育。基于FC_100(Go．01)的标准， 筛选到49个两性球花雄性结构显著差异表达的基因，从中选取了2个分别上调和下调表达 strobili 基因，由于功能未知，分别命名为BSU／(Bisexual 1)与BSDl(Bisexual upregulated strobili 1)；并进一步分析了它们在雌雄球花不同发育阶段的表达规律，BSUl downregulated 与BSDl在雌球花中各发育阶段具有相对稳定的表达并且与营养芽中的表达相似，而在雄球 花中各发育阶段表达水平却随着不同发育阶段急剧变化。BSUl随着雄球花的发育表达量逐 渐降低，而BSDl则逐渐增高，而在两性球花中它们的表达量却仍然维持在早期发育阶段水 平，表明这些基因的调控属于雄球花发育特异遗传调控程序，推测其在球花发育与性别决定 过程中可能发挥着重要作用。研究结果为油松及近缘树种的雌雄球花发育与性别决定的分子 生物学研究提供了基础和新的思路。 关键词：油松；表达谱；基因芯片；两性球花 生殖调控如花期、花量与性别的调控，以及控制授粉与避免自交等操作是针叶树种遗传 改良与良种生产中的重要环节。在长期的生产过程与实践中，育种工作者已经积累了很多有 et 形成而抑制雌球花形成(Rossa1．，1987)。但是对针叶树雌雄球花发育及性别调控的分子 生物学研究却严重滞后，很重要的一个原因是它们的基因组明显比大多数其他植物基因组大 (Morseela1．，2009)，全基因组测序工作进展缓慢，直至2013年5月才公布了第一种针叶 树一挪威云杉(Picea eta1．，2013)。其次，与被子植物显 abies)的全基因组草图(Nystedt et a1．，2010)，以致许多 著不同，裸子植物生殖器官多是单性而且缺少花被和心皮(Wang 在被子植物生殖遗传学中取得的重要进展对裸子植物中的相关研究推动作用有限(Mathews et aL，2012)，另外，裸子植物性成熟期十分漫长，生殖系统突变体筛选极其耗时，缺乏用 于遗传研究的良好材料。 tabuliforrnis 油松(Pinus Cart．)是裸子植物雌雄球花发育的分子调控研究的理想材料。 油松属于松柏纲、松科、松属，雌雄同株，球花单性，广泛分布于我国华北、西北及东北部 分地区的14个省市自治区，生态适生区达300万平方公里。我们在油松人工林中发现了6 株两性球花突变株。第2代测序技术的快速发展为探明其两性球花发育与性别转化机制及关 键基因筛选提供了契机(Nealeetal．，2008)，转录组测序只关注基因组中转录的部分，可 以避开针叶树基因组结构复杂、多重复序列等不利因素，可以较低的费用、快速地