鉴别猪伪狂犬病毒gE基因缺失疫苗和野毒感染的二重PCR诊断方法的建立和应用.pdfVIP

第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会论文集 2 结果 我们成功拼接出了PRV JS-2012 全长基因组，并与已经登录的PRV 基因组长度大致相当。结构 上，同样分为独特长区（UL ）和独特短区（US ），以及US 两侧的重复序列构成，重复序列由内部重 复序列（IRS ）和末端重复序列（TRS ）构成。在不同的基因组中长度有所差别。基因组GC 含量高达 73.46%，这也是基因扩增和测序难以成功的主要原因。将编码基因在全长基因组中进行定位，发现大 多数编码基因是保守的，但在基因组中的位置因毒株的不同而有所变动。预测显示约含有73 个开放 阅读框，47 个启动子起始信号，35 个poly （A ）信号，显示大约有2/3 的已知的PRV 基因与其他一 个或者三个以上的基因有共同的终止信号，产生共3’末端的转录本，编码约100 个病毒蛋白。 PRV JS-2012 的囊膜糖蛋白中变化较大的为gE ，gB ，gC 和gD 。其中，gE 基因与2012 年新分离 株的同源性高达99.9%，在进化树位于一个相对独立的分支，与以前的分离株的亲缘关系较远。与经 典毒株相比，在两个部位存在3 个连续的碱基的插入，在不同的毒株间，碱基插入不同。插入后氨基 酸序列增加了 2 个天冬氨酸。gE 的糖基化位点也发生了变化，同时对蛋白质结构与功能有重要意义 的半胱氨酸残基在gE 的分布比较保守。gB 基因变异较大，存在几个部位显著的特征性变化，包括特 征性替换和不连续的缺失。遗传演化分析发现其和其它参考株位于两个不同的分支。氨基酸序列分析 表明其核酸发生变异的区域多位于其B 细胞表位区域。抗原指数显示，gB 在多个位置的抗原性发生 了变化，抗原指数增强。JS-2012 gB 的糖基化位点多于Bartha k61 株，且增加位点多位于氨基酸变 异区域。gC 基因不仅存在很多点突变，而且还存在一段不连续的碱基插入和高变区。JS-2012 株 gC 基因和国内分离毒株有较高的同源性，位于一个分支上，而和其它参考毒株之间的变异较大，表明J S-2012 gC 基因可能和国内分离毒株有共同的起源。氨基酸序列存在 3 个部位的特征性插入。gC 的 糖基化位点发生变化，并且可能的糖基化位点多于Bartha k61 株。几个部位的抗原指数远高于其他区 域。gD 基因最特征的变异就是插入了连续 6 个碱基。另外病毒的囊膜蛋白、被膜蛋白以及核衣壳蛋 白编码基因都有不同程度的变异，非结构蛋白基因变异主要集中在与病毒复制和包装相关的基因，有 些非编码区的调控序列也有较大变异，比如增强子和复制起点序列。 3 讨论 对PRV JS-2012 株全基因组测序和功能区域进行遗传演化和变异分析，以及主要毒力蛋白的抗原 性分析，我们发现JS-2012 株病毒全基因组和编码蛋白的氨基酸序列发生了比较广泛的变异。很多部 位存在较多的碱基替换，有些主要结构蛋白和功能区发生了特征性的变化。我们对这些区域进行了预 测分析表明，其抗原性发生了变化，而有些区域与病毒的毒力相关。我们可以进一步研究这些变异蛋 白的结构和功能，分析其变异后对病毒的复制能力和毒力影响。有些非编码区域的变异也可能与毒力 相关，存在大量的碱基替换，并有特征性的连续碱基的插入。但是JS-2012 株毒力的差异是可能由多 个因素导致的，整体基因组的变异导致其抗原性差异的变化，这些综合因素导致其毒力增强。对这些 变异的功能区域的分析为我们进一步研究其毒力差异的变化提供材料，为新型基因工程缺失疫苗的开 发提供分子基础。 鉴别猪伪狂犬病毒 gE 基因缺失疫苗和野毒感染的二重 PCR 诊断 方法的建立和应用   赵雪丽 ，闫若潜，陈慧娟，赵明军，安春霞，吴志明 （河南省动物疫病预防控制中心，郑州，450008 ） 摘 要 为建立猪伪狂犬病毒（PRV ）gE 基因缺失疫苗和野毒感染的快速鉴别诊断方法，本研究根据猪伪狂犬病野毒 作者简介：赵雪丽（1979-），女，河南郑州人，高级兽医师，主要